Hic-5基因敲除对NF-κB/p65表达及CCl4诱导的肝纤维化小鼠模型的影响

来源 :临床肝胆病杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yun09
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目的探讨Hic-5基因敲除对NF-κB/p65表达及肝纤维化的影响。方法野生型C57BL/6雄性小鼠10只,随机分为2组,野生型对照组(WT-Control,n=5)、野生型实验组(WT-CCl4,n=5); Hic-5基因敲除C57BL/6雄性小鼠10只,随机分为2组,敲除对照组(Hic-5 KO-Control,n=5)、敲除实验组(Hic-5 KO-CCl4,n=5)。检测血清ALT和AST;天狼猩红染色观察肝组织胶原沉积;免疫组化检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、p65蛋白表达;定量PCR检测肝组织中α-SMA、Collagen1、p65 mRNA表达。分离小鼠原代肝星状细胞,在予以不同浓度TGFβ1刺激后定量PCR检测肝星状细胞中α-SMA、Collagen1、p65 mRNA的表达。多组间计量资料比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果天狼猩红染色显示,与WT-CCl4组相比较Hic-5 KO-CCl4组肝组织胶原纤维减少(P值<0. 001)。血清ALT和AST检测结果提示WT-Control组、WT-CCl4组、Hic-5KO-Control组、Hic-5 KO-CCl4组间ALT、AST比较差异均有统计学意义(F值分别为22. 85、25. 15,P值均<0. 001),Hic-5 KO-CCl4组血清ALT和AST水平均低于WT-CCl4组(P值均<0. 05);免疫组化显示WT-Control组、WT-CCl4组、Hic-5 KOControl组、Hic-5 KO-CCl4组4组间肝组织α-SMA、p65蛋白表达水平比较差异均有统计学意义(F值分别为207. 10、98. 16,P值均<0. 001),Hic-5 KO-CCl4组肝组织α-SMA、p65蛋白表达量低于WT-CCl4组(P值均<0. 01);定量PCR结果示WTControl组、WT-CCl4组、Hic-5 KO-Control组、Hic-5 KO-CCl4组4组间肝组织α-SMA、Collagen1、p65 mRNA相对表达量比较差异均有统计学意义(F值分别为41. 62、13. 93、98. 16,P值均<0. 001),Hic-5 KO-CCl4组肝组织α-SMA、Collagen1、p65 mRNA相对表达量低于WT-CCl4组(P值均<0. 05); 0 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml TGFβ1刺激原代肝星状细胞,WT(0 ng/ml、5 ng/ml、10ng/ml)组及KO(0 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml)组间α-SMA、Collagen1、p65 mRNA相对表达量比较差异均有统计学意义(F值分别为53. 90、75. 82、52. 41,P值均<0. 001),不同浓度TGFβ1刺激原代肝星状细胞Hic-5 KO组α-SMA、Collagen1、p65 mRNA相对表达量均低于WT组(P值均<0. 01)。结论 Hic-5基因敲除抑制NF-κB/p65表达,抑制肝星状细胞活化,缓解CCl4诱导的肝纤维化。
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