【摘 要】
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目的 探讨Pannexin3缝隙连接蛋白在外界冷热刺激下对成牙本质细胞释放三磷酸腺苷(ATP)的影响.方法 构建Pannexin3过表达慢病毒转染载体PLL3.7/CMV-PANNEXIN3/CMV-RFP,通过病
【机 构】
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454000,河南省焦作市第二人民医院口腔科
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目的 探讨Pannexin3缝隙连接蛋白在外界冷热刺激下对成牙本质细胞释放三磷酸腺苷(ATP)的影响.方法 构建Pannexin3过表达慢病毒转染载体PLL3.7/CMV-PANNEXIN3/CMV-RFP,通过病毒感染获取能够高表达Pannexin3的成牙本质细胞;合成siRNA、构建shRNA分别干扰成牙本质细胞Pannexin3基因表达.采用PCR、Western blot技术对过表达及干扰效果进行评价.将细胞分为对照组、过表达组、siRNA干扰组、shRNA干扰组及甘珀酸(CHX)功能阻断组共五组,对各组细胞分别进行冷热刺激.使用奎纳克林进行染色观察细胞ATP释放情况,通过Image Pro-plus计算荧光变化量,采用生物荧光法对释放到细胞外的ATP含量进行测定.结果 PCR、Western blot及荧光照片结果证明,Pannexin3过表达、siRNA、shRNA能有效感染成牙本质细胞,实现细胞Pannexin3基因的高表达和干扰效果.冷热刺激后成牙本质细胞内的ATP迅速释放到细胞外,Pannexin3过表达细胞释放速度明显高于对照组,使用siRNA、shRNA干扰或者CHX阻断Pannexin3通道都能抑制冷热刺激引起的细胞内ATP释放到胞外.结论 Pannexin3能在成牙本质细胞形成半通道,冷热刺激时细胞通过Pannexin3半通道释放ATP到细胞外.
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