【摘 要】
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克隆自肝素黄杆菌(Flavobacteriumheparinum)的肝素酶Ⅰ(Heparinase Ⅰ,EC4.2.2.7)广泛应用于低相对分子质量肝素(LMWH,low molecular weight heparin)制备研究。然而,该酶在
【机 构】
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江南大学药学院,江南大学糖化学与生物技术教育部重点实验室
【基金项目】
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教育部博士点基金项目(20110093110008)
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克隆自肝素黄杆菌(Flavobacteriumheparinum)的肝素酶Ⅰ(Heparinase Ⅰ,EC4.2.2.7)广泛应用于低相对分子质量肝素(LMWH,low molecular weight heparin)制备研究。然而,该酶在大肠杆菌表达体系中易形成包涵体,限制了其大量应用。将可溶性配体SUMO(small ubiquitin-like modifier,小泛素类似修饰蛋白质)与C端带有6×His标签的肝素酶基因片段N-端融合表达,菌体总蛋白质和可溶性蛋白质SDS-PAGE电泳表明,N端融合SUMO的肝素酶Ⅰ可溶性表达比率显著提高;通过镍-亲和柱层析得到均一纯化的融合肝素酶Ⅰ,融合酶酶学性质表明该融合酶可直接应用于肝素降解而无需切除SUMO标签,为肝素酶Ⅰ的广泛应用提供了良好的技术基础。
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