【摘 要】
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目的 通过检测肝癌组织中泛素结合酶E 2T(ubiquitin binding enzyme E2T,UBE2T)表达,探究其对肝癌细胞增殖、克隆形成及细胞周期的影响及其潜在分子机制.方法 采用实时荧光定量PCR实验(qRT-PCR)检测50例临床肝癌组织及其癌旁正常组织中UBE2T相对表达量;通过转染靶向UBE2T基因的shRNA干扰慢病毒载体GV248-shUBE2T-1,GV248-shUBE2T-2及阴性对照GV248-NC至肝癌HepG2细胞,构建UBE2T基因稳定干扰细胞系,并验证其转染敲降效
【机 构】
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江苏省海安市人民医院消化内科,江苏海安 226600
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目的 通过检测肝癌组织中泛素结合酶E 2T(ubiquitin binding enzyme E2T,UBE2T)表达,探究其对肝癌细胞增殖、克隆形成及细胞周期的影响及其潜在分子机制.方法 采用实时荧光定量PCR实验(qRT-PCR)检测50例临床肝癌组织及其癌旁正常组织中UBE2T相对表达量;通过转染靶向UBE2T基因的shRNA干扰慢病毒载体GV248-shUBE2T-1,GV248-shUBE2T-2及阴性对照GV248-NC至肝癌HepG2细胞,构建UBE2T基因稳定干扰细胞系,并验证其转染敲降效率;采用细胞增殖实验、克隆形成实验及细胞周期实验分别检测敲低UBE2T表达对肝癌细胞增殖、克隆形成及细胞周期的影响;蛋白免疫印迹实验检测PI3K/AKT信号通路关键靶基因PI3K和AKT磷酸化水平.结果 临床50例肝癌组织中UBE2T相对表达量为2.012±0.489,显著高于癌旁正常组织的1.102±0.533,差异有统计学意义(t=8.896,P<0.01).与阴性对照组(1.000±0.001)相比,转染干扰慢病毒载体的shUBE2T-1组(0.201±0.003)和shUBE2T-2组(0.246±0.005)中UBE2T表达明显降低,差异有统计学意义(F=518.800,P<0.001).shUBE2T-1组(0.392±0.028)和shUBE2T-2组(0.368±0.026)细胞增殖速率明显低于对照组(0.519±0.031),差异有统计学意义(F=24.477,P=0.001);shUBE2T-1组(5.018±0.521)和shUBE2T-2组(5.906±0.485)细胞克隆形成速率明显低于对照组(9.312±0.479),差异有统计学意义(F=62.819,P<0.001),并将细胞周期显著阻滞在G1期.shUBE2T-1组和shUBE2T-2组细胞中PI3K磷酸化水平为0.285±0.030和0.267±0.029,AKT磷酸化水平为0.454±0.037和0.411±0.039,均分别低于对照组的1.005±0.026和1.004±0.031,差异有统计学意义(F=659.930,255.517,均P<0.001),但其本底表达保持不变.结论 肝癌中UBE2T显著高表达,其可能通过诱导PI3K,AKT的磷酸化进而参与调控PI3K-AKT信号通路来促进肝癌细胞增殖.
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