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目的:
制备抗组织因子途径抑制物(TFPI)单克隆抗体。
方法:用微量TFPI脾内包埋免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/O细胞融合,建立了2株稳定分泌抗TFP1单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为4F4和4F8。对其中的一株4F8进行研究,其杂交瘤细胞染色体众数为93,分泌的抗体为IgG1。以简易正辛酸法从腹水纯化McAb 4F8, SDS-PAGE检测其纯度,Western blotting分析显示其可特异性地识别分子量为34800的抗原分子。对纯化的抗体以改良过碘酸钠氧化法用辣根过氧化物酶标记后,采用双夹心ELISA法检测正常人血浆TFPI含量。
结果:稀释的凝血酶原时间(PT)测定,McAb 4F8可缩短其凝固时间,且呈量效关系,McAb 4F8还可使乏因子Ⅸ血浆稀释的PT明显缩短。正常人血浆TFPI含量为103.2±11.5μg/L,结果与美国Diagnostica公司的TFPI ELISA试剂盒所测结果(98.4±10.3μg/L)相近(r=0.92)。
结论:McAb 4F8有潜在的药用价值,并可望为我国TFPI的研究提供精确的检测手段。