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[摘要] 目的 检测突发性聋患者血清心钠素水平，初步探讨血清心钠素水平与突发性聋程度及疗效的关系。方法 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测77例突发性聋患者治血清心钠素水平。结果 与正常对照组比较，突发性聋患者ANP含量显著升高（P<0.01），治疗有效组血清ANP含量在治疗后明显下降（P<0.01），而治疗无效组血清ANP含量虽有下降，但治疗前后ANP含量差异无统计意义（P>0.05）。结论 心钠素可能参与突发性聋的病理生理过程。
[关键词] 突发性聋 ；心钠素 ；耳蜗；酶联免疫吸附试验
[中图分类号] R764.43 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2017）06-174-03
[Abstract] Objective To detect the level of the serum atrial natriuretic peptide（ANP） in patients with sudden hearing loss（SHL）， and to study the relationships of the ANP degree and effect of SHL. Methods The level of serum ANP in 77 cases of SHL was detected br via enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）. Results The level of serum ANP in SHL group was higher than that in control group（P<0.01）. The level of serum ANP in effective SHL group decreased significantly（P<0.01）. Though the level of serum ANP in effectless SHL group decreased， the differences had no statistical significance（P>0.05）. Conclusion ANP may play important role in the pathophysiology procedure of SHL.
[Key words] Sudden hearing loss（SHL）； Atrial natriuretic peptide（ANP）； Cochlear； ELISA
突發性聋（sudden hearing loss，SHL）可伴有耳鸣、眩晕，是耳鼻咽喉科常见疾病之一，近年来其发病有增加的趋势。其病因及发病机制仍尚存争论，但血管性因素是可能的原因之一[1]。基础研究观察到心房钠尿肽（atrial natriuretic peptide，ANP）在内耳组织大量分布，可能参与调节耳蜗血流量、维持内淋巴电解质平衡及声信号传导，提示其在一些内耳微循环障碍所致疾病如突发性聋、老年性聋中的潜在应用价值。本研究通过检测突发性聋患者血清ANP水平，分组比较，初步探讨其在突發性聋病程中的作用。
1 资料与方法
1.1 一般资料
2013年8月～2016年1月我科77例突发性聋患者，男34例，女43例；年龄19～66岁，平均（43.0±9.2）岁，全部病例均为首次发病，发病时间小于7d，其中不伴眩晕者56 例，伴眩晕者21例。均符合《突发性聋的诊断和治疗指南（2005，济南）》[2]。排除中耳病变、内耳畸形及蜗后占位性病变，全部患者均不伴高血压、糖尿病等内科疾病；另选取我院同期35例体检听力正常健康者设为对照组，男15例，女20例；年龄21～64岁，平均（42.0±8.3）岁，两组性别、年龄等一般资料比较无统计学意义（P>0.05）。
1.2 治疗方法
所有患者予甲钴胺（石药集团欧意药业有限公司，H20055382）、舒血宁（神威药业集团有限公司，Z13020796）、前列地尔（广东星昊药业有限公司，H22026344）及强的松（江西国药有限责任公司，H36022365）1mg/kg，最大剂量不超过 50mg；3d后减量治疗，重度和极重度聋者予东菱迪芙酶（北京托毕西药业有限公司，H20031074）治疗（首剂10Bu，以后隔日5Bu，总剂量30Bu），同时监测凝血功能，1个疗程10～15d。
1.3 听力检查标准
隔音室内用美国GSI产 67 型听力计按照常规进行纯音听阈测试。根据WHO1997听力障碍分级标准[3]，轻度听力损失15例（听阈26～40dB）；中度21例（听阈41～60dB），共36例；重度27例（听阈61～80dB），极重度14例（听阈>80dB）；共41例；治疗后按《突发性聋的诊断和治疗指南（2005，济南）》标准评价疗效，其中痊愈28例，显效16例，有效14例；总有效58例，无效19例。
1.4 ANP检测
患者入院后使用促凝管清晨空腹抽取对照组人群及受试者治疗前、治疗10d后肘静脉血4mL，3500rpm离心9min，吸取血清2mL，低温（-50±1）℃保存待检，人心钠素（ANP）ELISA检测试剂盒购自美国R&D生物公司。实验操作按产品说明书进行，采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清ANP浓度。
1.5 统计学处理
SPSS11.0软件处理文中数据，采用（）表示计量资料，行t检验；采用百分比（%）表示计数资料，行χ2检验，P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 突发性聋患者血清心钠素含量
与对照组比较，实验组血清ANP含量显著升高；不同听力损失程度患者血清ANP含量差异无统计学意义；伴眩晕组及不伴眩晕组血清ANP含量差异无统计学意义。见表1。 2.2 突发性聋患者治疗前后ANP含量
治疗有效组血清ANP含量在治疗后明显下降，治疗无效组血清ANP含量在治疗后虽有下降，但差异无统计意义。见表2。
3 讨论
SHL病变部位多在耳蜗，由于耳蜗位置深邃，难以获得病变活检标本，其病因及发病机制仍无定论。关于SHL的发病机制主要有病毒感染、内淋巴积水、内耳微循环障碍、免疫因素等学说。其中内耳微循环障碍导致血管内皮细胞损害、组织细胞肿胀是被广泛接受的假说[4]。内耳供血血管一旦发生阻塞，内耳组织极易缺血缺氧，进而损害毛细胞，如果得不到及时治疗，可能造成内耳不可逆损伤[5]。动物实验亦发现，内耳持续缺血6秒，耳蜗电位即消失，缺血超过30min后，即可导致耳蜗电位不可逆变化[6]。耳蜗的血流量依靠神经体液调节、自动调节及局部代谢产物调节共同维持，起主要作用的部位在SMA。
ANP是利钠尿肽（NP）家族中的一员，具有强大的扩张血管、增加组织血流量及调节局部组织水电解质平衡等作用。ANP几乎在机体各组织器官均有分布。在内耳螺旋韧带、Corti器、螺旋神经节、血管纹及SMA的亦可观察到ANP大量分布，提示ANP在内耳淋巴液的生成、声信号的传导及耳蜗血流量的调节具有重要作用 [7]。ANP可能通过与SMA血管内皮细胞上的受体结合，舒张血管，增加内耳血流。Rachel等[8]发现ANP能在保持全身循环指标在基础条件、注射前及注射后稳定的同时以剂量依赖的方式增加前庭血流量。林颖等认为ANP的扩血管作用对耳蜗供血血管有较强的选择性 [9]，进一步说明ANP对耳蜗血流量的调节作用。王剑等[10]发现ANP 在蜗神经节细胞大量分布，并存在ANP阳性表达为主的神经细胞；周柯等研究提示ANP可能参与听神经信号传递的调节 [11]；Dornhoffer等[12]观察到圆窗膜注射ANP可引起大鼠内耳NPR受体表达上调，Yan等[13]发现ANP可降低大鼠血管纹上皮钠通道蛋白mRNA的表达。同时，熊巍等[14]研究提示ANP可减轻耳蜗的缺血再灌注损伤。虽然作用机制尚未完全阐明，但这些基础研究都提示ANP对维持内耳功能具有独特作用，ANP可能对内耳微循环障碍所致的疾病如突发性聋、老年性聋、噪声性聋等的病情评估及临床治疗具有一定价值，但相关的临床研究尚未见报道。
本实验发现，突发性聋患者ANP含量显著升高，治疗有效组血清ANP含量在治疗后明显下降，而治疗无效组血清ANP含量虽有下降，但其差异无统计意义。我们推测这可能与SHL时血浆内皮素水平的变化有关。内皮素是刺激ANP合成与分泌的最强体液因子，能明显增强ANP基因的表达及合成[15]。有研究发现，突发性聋患者血浆内皮素含量升高[16]，治疗有效组内皮素含量明显低于治疗前，治疗无效组内皮素含量较治疗前无明显差异。突发性聋患者内耳局部缺血缺氧、血管内皮细胞损害，导致内皮素的合成与释放 [17]，进而刺激ANP的合成与释放。ANP水平的升高有利于扩张SMA，改善内耳血供，保护内耳缺血再灌注损伤，并维持内淋巴水电解质平衡，在一定程减轻致病因素对内耳损害。治疗有效者局部缺血缺氧改善，内皮素水平降低[17]，ANP水平亦逐渐下降。SHL患者ANP与内皮素相关关系有待进一步研究。
总之，本实验发现SHL患者血清ANP含量显著升高，治疗有效组血清ANP含量在治疗后明显下降。ANP作为一种保护性因素在一定程度上參与突发性聋的病理生理过程，可以为突发性聋的预后评估提供参考。
[参考文献]
[1] Mosiner I，Stepanian A，Baron G，et al.Cardiovascular and thromboembolic risk factors in idiopathic sensorineural hearing hoss： a case-control study[J].Audiol Nuetootol，2011，16（1）：55-66.
[2] 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志编辑委员会，中华医学会耳鼻咽喉头颈外科学分会. 突发性聋的诊断和治疗指南（2005，济南）[J].中华耳鼻咽喉头颈外科雜志，2006，41：569.
[3] 刘慧茹，曹建国，徐永昌，等.突发性耳聋预后的相关因素分析[J].中国当代医药，2014，21（6）：34-36，39.
[4] 谢怡.甲泼尼龙治疗青少年不同类型突发性耳聋的临床效果[J].中国当代医药，2016，23（8）：107-110.
[5] 郑雅丽，李永新，于子龙，等.突发性聋预后影响因素[J].中国耳鼻咽喉头颈外科，2008，15：451.
[6] Tsuji S，Tabuchi K，Hara A，et al.long-term observation on the reversibility of cochlear dysfunction after transient ischemia[j].Hear Res，2002，166：72.
[7] 陈合新，史剑波，邱建华，等.心钠素免疫反应在豚鼠耳蜗中的整体分布[J].中国临床解剖学杂志，2002，20（4）：290-291.
[8] Rachel JD，Dziadziola JK，Quirk WS.Atrial natriuretic peptide participates in the regulation of vestibular blood flow[J]. Hear Res，1995，89（1-2）：181-186.
[9] 林颖，邱建华，乔丽，等.心钠素对耳蜗微循环的影响[J].听力学及言语疾病杂志，2006，14（5）：347-350.
[10] 王剑，乔莉，邱建华.一氧化氮合成酶和心钠素在豚鼠耳蜗中的分布[J].细胞与分子免疫学杂志2007，23（3）：273-275.
[11] 周柯，孙菲，邱建华，等.心钠素在原代培养大鼠耳蜗螺旋神经元细胞中的表达[J].中华耳科学杂志，2010，8（2）：225-230.
[12] Dornhoffer JL，Danner C，Li S，et al.Atrial natriuretic peptide receptor upregulation in the rat inner ear[J].Ann Otol Rhinol Laryngol，2002，111（11）：1040-1044.
[13] Yan L，Qingjie X，Zengliang X，et al.Atrial natriuretic peptide reduces the α-subunit of the epithelial sodium channel mRNA expression in the mouse stria vascularis[J].Biomed Rep，2015，3（2）：159-162.
[14] 熊巍，邱建华，林颖，等.心钠素对耳蜗缺血再灌注损伤的影响[J].中华耳鼻咽喉头颈外科杂志，2006，41（4）：293-296.
[15] 周志华，杨博.内皮素和心钠素的相互作用机制[J].四川生理科学杂志，2002，24（3）：106-108.
[16] 施典羽，杨凯，敬光怀，等.特发性突聋患者外周血内皮素的变化及其意义[J].海南医学，2010，21（24）：57-59.
[17] 王星宇，孔锋，张丽蓉，等.突发性聋患者血浆内皮素-1和降钙素基因相关肽改变的观察[J].首都医科大学报，1998，12（2）：168-170.
（收稿日期：2017-01-05）
[关键词] 突发性聋 ；心钠素 ；耳蜗；酶联免疫吸附试验
[中图分类号] R764.43 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2017）06-174-03
[Abstract] Objective To detect the level of the serum atrial natriuretic peptide（ANP） in patients with sudden hearing loss（SHL）， and to study the relationships of the ANP degree and effect of SHL. Methods The level of serum ANP in 77 cases of SHL was detected br via enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）. Results The level of serum ANP in SHL group was higher than that in control group（P<0.01）. The level of serum ANP in effective SHL group decreased significantly（P<0.01）. Though the level of serum ANP in effectless SHL group decreased， the differences had no statistical significance（P>0.05）. Conclusion ANP may play important role in the pathophysiology procedure of SHL.
[Key words] Sudden hearing loss（SHL）； Atrial natriuretic peptide（ANP）； Cochlear； ELISA
突發性聋（sudden hearing loss，SHL）可伴有耳鸣、眩晕，是耳鼻咽喉科常见疾病之一，近年来其发病有增加的趋势。其病因及发病机制仍尚存争论，但血管性因素是可能的原因之一[1]。基础研究观察到心房钠尿肽（atrial natriuretic peptide，ANP）在内耳组织大量分布，可能参与调节耳蜗血流量、维持内淋巴电解质平衡及声信号传导，提示其在一些内耳微循环障碍所致疾病如突发性聋、老年性聋中的潜在应用价值。本研究通过检测突发性聋患者血清ANP水平，分组比较，初步探讨其在突發性聋病程中的作用。
1 资料与方法
1.1 一般资料
2013年8月～2016年1月我科77例突发性聋患者，男34例，女43例；年龄19～66岁，平均（43.0±9.2）岁，全部病例均为首次发病，发病时间小于7d，其中不伴眩晕者56 例，伴眩晕者21例。均符合《突发性聋的诊断和治疗指南（2005，济南）》[2]。排除中耳病变、内耳畸形及蜗后占位性病变，全部患者均不伴高血压、糖尿病等内科疾病；另选取我院同期35例体检听力正常健康者设为对照组，男15例，女20例；年龄21～64岁，平均（42.0±8.3）岁，两组性别、年龄等一般资料比较无统计学意义（P>0.05）。
1.2 治疗方法
所有患者予甲钴胺（石药集团欧意药业有限公司，H20055382）、舒血宁（神威药业集团有限公司，Z13020796）、前列地尔（广东星昊药业有限公司，H22026344）及强的松（江西国药有限责任公司，H36022365）1mg/kg，最大剂量不超过 50mg；3d后减量治疗，重度和极重度聋者予东菱迪芙酶（北京托毕西药业有限公司，H20031074）治疗（首剂10Bu，以后隔日5Bu，总剂量30Bu），同时监测凝血功能，1个疗程10～15d。
1.3 听力检查标准
隔音室内用美国GSI产 67 型听力计按照常规进行纯音听阈测试。根据WHO1997听力障碍分级标准[3]，轻度听力损失15例（听阈26～40dB）；中度21例（听阈41～60dB），共36例；重度27例（听阈61～80dB），极重度14例（听阈>80dB）；共41例；治疗后按《突发性聋的诊断和治疗指南（2005，济南）》标准评价疗效，其中痊愈28例，显效16例，有效14例；总有效58例，无效19例。
1.4 ANP检测
患者入院后使用促凝管清晨空腹抽取对照组人群及受试者治疗前、治疗10d后肘静脉血4mL，3500rpm离心9min，吸取血清2mL，低温（-50±1）℃保存待检，人心钠素（ANP）ELISA检测试剂盒购自美国R&D生物公司。实验操作按产品说明书进行，采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清ANP浓度。
1.5 统计学处理
SPSS11.0软件处理文中数据，采用（）表示计量资料，行t检验；采用百分比（%）表示计数资料，行χ2检验，P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 突发性聋患者血清心钠素含量
与对照组比较，实验组血清ANP含量显著升高；不同听力损失程度患者血清ANP含量差异无统计学意义；伴眩晕组及不伴眩晕组血清ANP含量差异无统计学意义。见表1。 2.2 突发性聋患者治疗前后ANP含量
治疗有效组血清ANP含量在治疗后明显下降，治疗无效组血清ANP含量在治疗后虽有下降，但差异无统计意义。见表2。
3 讨论
SHL病变部位多在耳蜗，由于耳蜗位置深邃，难以获得病变活检标本，其病因及发病机制仍无定论。关于SHL的发病机制主要有病毒感染、内淋巴积水、内耳微循环障碍、免疫因素等学说。其中内耳微循环障碍导致血管内皮细胞损害、组织细胞肿胀是被广泛接受的假说[4]。内耳供血血管一旦发生阻塞，内耳组织极易缺血缺氧，进而损害毛细胞，如果得不到及时治疗，可能造成内耳不可逆损伤[5]。动物实验亦发现，内耳持续缺血6秒，耳蜗电位即消失，缺血超过30min后，即可导致耳蜗电位不可逆变化[6]。耳蜗的血流量依靠神经体液调节、自动调节及局部代谢产物调节共同维持，起主要作用的部位在SMA。
ANP是利钠尿肽（NP）家族中的一员，具有强大的扩张血管、增加组织血流量及调节局部组织水电解质平衡等作用。ANP几乎在机体各组织器官均有分布。在内耳螺旋韧带、Corti器、螺旋神经节、血管纹及SMA的亦可观察到ANP大量分布，提示ANP在内耳淋巴液的生成、声信号的传导及耳蜗血流量的调节具有重要作用 [7]。ANP可能通过与SMA血管内皮细胞上的受体结合，舒张血管，增加内耳血流。Rachel等[8]发现ANP能在保持全身循环指标在基础条件、注射前及注射后稳定的同时以剂量依赖的方式增加前庭血流量。林颖等认为ANP的扩血管作用对耳蜗供血血管有较强的选择性 [9]，进一步说明ANP对耳蜗血流量的调节作用。王剑等[10]发现ANP 在蜗神经节细胞大量分布，并存在ANP阳性表达为主的神经细胞；周柯等研究提示ANP可能参与听神经信号传递的调节 [11]；Dornhoffer等[12]观察到圆窗膜注射ANP可引起大鼠内耳NPR受体表达上调，Yan等[13]发现ANP可降低大鼠血管纹上皮钠通道蛋白mRNA的表达。同时，熊巍等[14]研究提示ANP可减轻耳蜗的缺血再灌注损伤。虽然作用机制尚未完全阐明，但这些基础研究都提示ANP对维持内耳功能具有独特作用，ANP可能对内耳微循环障碍所致的疾病如突发性聋、老年性聋、噪声性聋等的病情评估及临床治疗具有一定价值，但相关的临床研究尚未见报道。
本实验发现，突发性聋患者ANP含量显著升高，治疗有效组血清ANP含量在治疗后明显下降，而治疗无效组血清ANP含量虽有下降，但其差异无统计意义。我们推测这可能与SHL时血浆内皮素水平的变化有关。内皮素是刺激ANP合成与分泌的最强体液因子，能明显增强ANP基因的表达及合成[15]。有研究发现，突发性聋患者血浆内皮素含量升高[16]，治疗有效组内皮素含量明显低于治疗前，治疗无效组内皮素含量较治疗前无明显差异。突发性聋患者内耳局部缺血缺氧、血管内皮细胞损害，导致内皮素的合成与释放 [17]，进而刺激ANP的合成与释放。ANP水平的升高有利于扩张SMA，改善内耳血供，保护内耳缺血再灌注损伤，并维持内淋巴水电解质平衡，在一定程减轻致病因素对内耳损害。治疗有效者局部缺血缺氧改善，内皮素水平降低[17]，ANP水平亦逐渐下降。SHL患者ANP与内皮素相关关系有待进一步研究。
总之，本实验发现SHL患者血清ANP含量显著升高，治疗有效组血清ANP含量在治疗后明显下降。ANP作为一种保护性因素在一定程度上參与突发性聋的病理生理过程，可以为突发性聋的预后评估提供参考。
[参考文献]
[1] Mosiner I，Stepanian A，Baron G，et al.Cardiovascular and thromboembolic risk factors in idiopathic sensorineural hearing hoss： a case-control study[J].Audiol Nuetootol，2011，16（1）：55-66.
[2] 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志编辑委员会，中华医学会耳鼻咽喉头颈外科学分会. 突发性聋的诊断和治疗指南（2005，济南）[J].中华耳鼻咽喉头颈外科雜志，2006，41：569.
[3] 刘慧茹，曹建国，徐永昌，等.突发性耳聋预后的相关因素分析[J].中国当代医药，2014，21（6）：34-36，39.
[4] 谢怡.甲泼尼龙治疗青少年不同类型突发性耳聋的临床效果[J].中国当代医药，2016，23（8）：107-110.
[5] 郑雅丽，李永新，于子龙，等.突发性聋预后影响因素[J].中国耳鼻咽喉头颈外科，2008，15：451.
[6] Tsuji S，Tabuchi K，Hara A，et al.long-term observation on the reversibility of cochlear dysfunction after transient ischemia[j].Hear Res，2002，166：72.
[7] 陈合新，史剑波，邱建华，等.心钠素免疫反应在豚鼠耳蜗中的整体分布[J].中国临床解剖学杂志，2002，20（4）：290-291.
[8] Rachel JD，Dziadziola JK，Quirk WS.Atrial natriuretic peptide participates in the regulation of vestibular blood flow[J]. Hear Res，1995，89（1-2）：181-186.
[9] 林颖，邱建华，乔丽，等.心钠素对耳蜗微循环的影响[J].听力学及言语疾病杂志，2006，14（5）：347-350.
[10] 王剑，乔莉，邱建华.一氧化氮合成酶和心钠素在豚鼠耳蜗中的分布[J].细胞与分子免疫学杂志2007，23（3）：273-275.
[11] 周柯，孙菲，邱建华，等.心钠素在原代培养大鼠耳蜗螺旋神经元细胞中的表达[J].中华耳科学杂志，2010，8（2）：225-230.
[12] Dornhoffer JL，Danner C，Li S，et al.Atrial natriuretic peptide receptor upregulation in the rat inner ear[J].Ann Otol Rhinol Laryngol，2002，111（11）：1040-1044.
[13] Yan L，Qingjie X，Zengliang X，et al.Atrial natriuretic peptide reduces the α-subunit of the epithelial sodium channel mRNA expression in the mouse stria vascularis[J].Biomed Rep，2015，3（2）：159-162.
[14] 熊巍，邱建华，林颖，等.心钠素对耳蜗缺血再灌注损伤的影响[J].中华耳鼻咽喉头颈外科杂志，2006，41（4）：293-296.
[15] 周志华，杨博.内皮素和心钠素的相互作用机制[J].四川生理科学杂志，2002，24（3）：106-108.
[16] 施典羽，杨凯，敬光怀，等.特发性突聋患者外周血内皮素的变化及其意义[J].海南医学，2010，21（24）：57-59.
[17] 王星宇，孔锋，张丽蓉，等.突发性聋患者血浆内皮素-1和降钙素基因相关肽改变的观察[J].首都医科大学报，1998，12（2）：168-170.
（收稿日期：2017-01-05）