【摘 要】
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目的: 研究人类系统性RNAi相关基因flj20174的克隆表达、亚细胞定位和表达谱,以及功能的初步探索.方法:利用生物信息学方法分析、预测flj20174基因的表达谱和功能;采用RT-PCR
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目的: 研究人类系统性RNAi相关基因flj20174的克隆表达、亚细胞定位和表达谱,以及功能的初步探索.方法:利用生物信息学方法分析、预测flj20174基因的表达谱和功能;采用RT-PCR技术,从健康人外周血单个核细胞cDNA中,扩增获得flj20174可能的全长编码区,并将其亚克隆于pEGFP-N1载体;利用Northern杂交鉴定其转录本;利用半定量PCR确定flj20174在免疫组织和免疫细胞中的表达谱;通过脂质体转染入HeLa细胞,观察融合蛋白的亚细胞定位和过表达对细胞状态的影响.结果与结论:获得了2 484 bp的全长编码区,测序后发现与NCBI公布的Ak00018的序列完全一致;Northern杂交证实其转录本约为4 669 bp;证实该基因属于低丰度基因,在免疫细胞中有相对较高的表达,并在B细胞和T细胞激活后表达量下降;与EGFP融合表达后可见该蛋白主要分布于内膜系统,而且过表达该融合蛋白可以引起细胞的死亡,推测此过程可能与机体的免疫防御相关.
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