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摘要：目的：探讨miR-331-3p与原发性肝细胞癌（HCC）肿瘤特征关系。方法 RT-PCR方法检测25例肝硬化患者，20例慢性肝炎患者，50例HCC患者血清miR-331-3p含量。结果 miR-331-3p对HCC有诊断效能（AUC=0.740），并与肿瘤的大小及是否具侵袭血管或淋巴明显相关。结论 miR-331-3p是HCC诊断潜在标志物。
关键词：原发性肝细胞癌;微小RNA;血清;诊断
中图分类号：R735.7 文献标志码：A
Exploration of Serum miR-331-3p as Biomarkers for Hepatocellular Carcinoma
Abstract：[Objective] To explore the relationship between miR-331-3p and the characteristics of HCC. [Methods] Serum miR-331-3p levels in 25 patients with liver cirrhosis， 20 patients with chronic hepatitis and 50 patients with HCC were measured. [Results] MiR-331-3p could efficiently diagnose HCC from high risk patients with AUC of 0.740 and was significantly correlated with the tumor size and tumor invasion of blood vessels or lymph nodes. [Conclusions] Serum miR-331-3p was a potential marker in diagnosis of HCC.
Key words： hepatocellular carcinoma; microRNA; serum; diagnosis
基础研究及前期工作表明血清中miR-331-3p可以作为原发性肝细胞癌（HCC）的诊断标志物[1]，在这里对miR-331-3p与肿瘤病例特征的关系进一步研究。
1 对象与方法
1.1 對象
以50例HCC患者，45例慢性肝病（CLD）患者，其中肝硬化（LC）患者25例，慢性肝炎（CH）病人20例为研究对象。
1.2 标本收集
收集研究对象血清，置于-80℃冰箱保存待用。
1.3血清RNA提取及miR-331-3p测定
应用TRizol法进行RNA提取。TaqMan qRT-PCR法进行miR-331-3p测定。
1.4统计学分析
用cel-miR-39标准化miRNA的表达量，以2-ΔCT （CT miR- CTcel-miR-39）[2]来计算。计量组间应用ANOVA分析。Pearson进行相关性分析。P<0.05被认为有统计学显著性差异。
2 结果
2.1 肝癌患者肝癌病理特征
单发肿瘤27例，多发肿瘤23例。按巴塞罗那（BCLC）分级方式对肿瘤进行分级[2]：0+A期有23例，B期18例，C期8例，D期1例。（表1）
2.2 miR-331-3p对HCC的诊断效能分析
对miR-331-3p建立从CLD（CH+LC）人群诊断HCC的ROC曲线。miR-331-3p曲线下面积为0.740。Cutoff值为0.740时，诊断的灵敏度和特异性分别为66%，78%。
2.3 miR-331-3p与肿瘤特征的关系
对miR-331-3p与肿瘤特征做相关性分析，miR-331-3p与肿瘤是否为多发无显著相关性，与肿瘤大小显著相关（r=0.389， P=0.005），随着肿瘤直径增加呈上升趋势， 与肿瘤是否侵袭血管或淋巴相关（r=0.586， P=0.001），在有侵袭肿瘤患者血清含量显著高于非侵袭者。（表1）
3 讨论
基础研究显示miR-331-3p通过抑制蛋白磷酸酶PHLPP介导的AKT的去磷酸化过程，具有促进肝细胞的增殖和侵袭的作用，在HCC组织中显著上升[6]。本研究对血清miR-331-3p含量的测定和组织报道相一致。进一步对血清miR-331-3p与肿瘤特征进行相关性分析表明血清miR-331-3p含量与肿瘤大小以及肿瘤是否侵袭血管或淋巴显著相关。
在我国肝炎，肝硬化这些高危人群中，早期发现肝癌，早期进行治疗对降低病死率有着重要意义[3]。本研究发现血清miR-331-3p是在慢性肝病高危人群中诊断HCC的新型标志物，是对传统标志物AFP的补充。
参考文献：
[1]Jian Li， Sun Qiyu， Tiezheng Wang， et al. A Combination of GPC3， miR122 and AFP in detecting hepatocellular carcinoma.Open Life Sci. 2019; 14： 53–61
[2]Wen Y， Han J， Chen J， et al. Plasma miRNAs as early biomarkers for detecting hepatocellular carcinoma. Int J Cancer. 2015; 137：1679-1690.
[3]王黎君， 殷鹏， 刘韫宁， 刘江美， 齐金蕾， 周脉耕. 1990年与2013年中国人群肝癌疾病负担研究. 中华流行病学杂志. 2016，37（6）： 758-62.
关键词：原发性肝细胞癌;微小RNA;血清;诊断
中图分类号：R735.7 文献标志码：A
Exploration of Serum miR-331-3p as Biomarkers for Hepatocellular Carcinoma
Abstract：[Objective] To explore the relationship between miR-331-3p and the characteristics of HCC. [Methods] Serum miR-331-3p levels in 25 patients with liver cirrhosis， 20 patients with chronic hepatitis and 50 patients with HCC were measured. [Results] MiR-331-3p could efficiently diagnose HCC from high risk patients with AUC of 0.740 and was significantly correlated with the tumor size and tumor invasion of blood vessels or lymph nodes. [Conclusions] Serum miR-331-3p was a potential marker in diagnosis of HCC.
Key words： hepatocellular carcinoma; microRNA; serum; diagnosis
基础研究及前期工作表明血清中miR-331-3p可以作为原发性肝细胞癌（HCC）的诊断标志物[1]，在这里对miR-331-3p与肿瘤病例特征的关系进一步研究。
1 对象与方法
1.1 對象
以50例HCC患者，45例慢性肝病（CLD）患者，其中肝硬化（LC）患者25例，慢性肝炎（CH）病人20例为研究对象。
1.2 标本收集
收集研究对象血清，置于-80℃冰箱保存待用。
1.3血清RNA提取及miR-331-3p测定
应用TRizol法进行RNA提取。TaqMan qRT-PCR法进行miR-331-3p测定。
1.4统计学分析
用cel-miR-39标准化miRNA的表达量，以2-ΔCT （CT miR- CTcel-miR-39）[2]来计算。计量组间应用ANOVA分析。Pearson进行相关性分析。P<0.05被认为有统计学显著性差异。
2 结果
2.1 肝癌患者肝癌病理特征
单发肿瘤27例，多发肿瘤23例。按巴塞罗那（BCLC）分级方式对肿瘤进行分级[2]：0+A期有23例，B期18例，C期8例，D期1例。（表1）
2.2 miR-331-3p对HCC的诊断效能分析
对miR-331-3p建立从CLD（CH+LC）人群诊断HCC的ROC曲线。miR-331-3p曲线下面积为0.740。Cutoff值为0.740时，诊断的灵敏度和特异性分别为66%，78%。
2.3 miR-331-3p与肿瘤特征的关系
对miR-331-3p与肿瘤特征做相关性分析，miR-331-3p与肿瘤是否为多发无显著相关性，与肿瘤大小显著相关（r=0.389， P=0.005），随着肿瘤直径增加呈上升趋势， 与肿瘤是否侵袭血管或淋巴相关（r=0.586， P=0.001），在有侵袭肿瘤患者血清含量显著高于非侵袭者。（表1）
3 讨论
基础研究显示miR-331-3p通过抑制蛋白磷酸酶PHLPP介导的AKT的去磷酸化过程，具有促进肝细胞的增殖和侵袭的作用，在HCC组织中显著上升[6]。本研究对血清miR-331-3p含量的测定和组织报道相一致。进一步对血清miR-331-3p与肿瘤特征进行相关性分析表明血清miR-331-3p含量与肿瘤大小以及肿瘤是否侵袭血管或淋巴显著相关。
在我国肝炎，肝硬化这些高危人群中，早期发现肝癌，早期进行治疗对降低病死率有着重要意义[3]。本研究发现血清miR-331-3p是在慢性肝病高危人群中诊断HCC的新型标志物，是对传统标志物AFP的补充。
参考文献：
[1]Jian Li， Sun Qiyu， Tiezheng Wang， et al. A Combination of GPC3， miR122 and AFP in detecting hepatocellular carcinoma.Open Life Sci. 2019; 14： 53–61
[2]Wen Y， Han J， Chen J， et al. Plasma miRNAs as early biomarkers for detecting hepatocellular carcinoma. Int J Cancer. 2015; 137：1679-1690.
[3]王黎君， 殷鹏， 刘韫宁， 刘江美， 齐金蕾， 周脉耕. 1990年与2013年中国人群肝癌疾病负担研究. 中华流行病学杂志. 2016，37（6）： 758-62.