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目的:目前关于原发性高血压的病因仍然不清楚,发病机制仍在不断探索中。高血压的慢性炎症状态是一个较新的研究命题。Psgl-1是作为P选择素的配体被发现的粘附分子,当炎症反应时,介导白细胞在滚动中被内皮细胞捕获,诱导起始粘附并使粘附作用不断加强,最终介导炎症反应。Psgl-1在炎症反应中起着重要作用。以Psgl-1为靶点来防治心脑血管疾病日益受到国内外的关注。本实验通过观察和比较Psgl-1基因敲除小鼠和野生型对照组小鼠在血管紧张素Ⅱ诱导的急、慢性高血压模型中的血压变化,明确Psgl-1缺乏对高血压的降压作用,并对Psgl-1缺乏时可能参与炎性调节的相关因子进行检测,明确Psgl-1缺乏在血管紧张素Ⅱ诱导的高血压中的降压作用的可能机制,为高血压治疗提供新的靶点。研究方法:本研究采用8-10周龄雄性C57BL6/J野生型(WT)小鼠和Psgl-1基因敲除(Psgl-1-/-)小鼠作为研究对象。1、为明确Psgl-1在急性血压调节方面的作用,将累积量的Ang Ⅱ(0.2,2,20,200μg/kg)通过颈静脉输液注射泵注入WT组小鼠和Psgl-1-/-组小鼠体内,浓度间隔时间5分钟,并通过颈动脉插管术进行血压测量。2、为了明确血液来源Psgl-1缺乏对血压的保护作用的重要性,对小鼠进行辐射并行骨髓移植术。选择雄性WT小鼠为骨髓移植受体小鼠,对受体小鼠进行辐射,并通过尾静脉注射接受来自WT小鼠和Psgl-1-/-小鼠的骨髓细胞。骨髓移植后6周,将累积量的Ang Ⅱ通过颈静脉输液注射泵注入受体小鼠体内,并通过颈动脉插管术进行血压测量。3、为检测封闭Psgl-1作为治疗高血压新靶点的可能性,对WT小鼠进行封闭性抗体注射,即对8-10周龄的雄性WT小鼠腹膜内注射抗鼠Psgl-1抗体4RA10或同形对照抗体鼠IgGik(100μg/200μl PBS),第二天再对两组小鼠泵入累积量Ang Ⅱ并测量血压。4、为明确Psgl-1在慢性血压调节方面的作用,通过迷你灌注胶囊将生理盐水或Ang Ⅱ泵入WT小鼠或Psgl-1-/-小鼠体内诱导慢性高血压模型,生理盐水和Ang Ⅱ浓度和注射速度为500ng/kg/min,时间2周,从实验前一周至实验结束时,每天通过尾套法测量各组小鼠血压,比较各组小鼠血压的变化。5、所有小鼠处死时通过心室采血,取血浆应用ELISA方法测定各组小鼠血浆 sP-sel、sE-sel、IL-17、MCP-1、CXCL-1 等因子水平。6、为明确 IL-17 是否参与了 Psgl-1缺乏对Ang Ⅱ诱导的血压升高的保护作用,选择8周龄Psgl-1-/-小鼠,将IL-17或PBS通过尾静脉注入小鼠体内(1000ng/200μl PBS),5小时后对两组小鼠泵入Ang Ⅱ,并通过颈动脉导管插管测量血压。7、为检测WT组小鼠和Psgl-1-/-组小鼠中可释放IL-17的细胞在Ang Ⅱ作用后的变化,提取全血白细胞并进行流式细胞分析。将PBS或累积剂量Ang Ⅱ通过颈静脉作用于两组小鼠,60分钟后采外周血进行流式细胞分析,细胞应用荧光抗体染色CD3(代表T细胞总数),CD45(代表白细胞总数)和IL-17A。8、为明确Psgl-1-/-小鼠在Ang Ⅱ慢性作用下靶器官损害情况,应用HE染色主动脉、胶原染色肾脏,并应用实时定量PCR方法测定肾脏中MCP-1、CXCL-1、ICAM-1、IL-6 和 IL-17 含量,主动脉中 ET-1 和 Agtr1b 含量。结果:1、不同浓度Ang Ⅱ作用下,Psgl-1-/-组小鼠与WT组小鼠的收缩压和舒张压均升高;与WT组小鼠相比较,Ang Ⅱ诱导的收缩压和舒张压升压作用在Psgl-1-/-组小鼠中均显著降低。2、与接受WT小鼠骨髓细胞移植的小鼠相比较,在接受Psgl-1-/-小鼠骨髓细胞移植的小鼠中Ang Ⅱ诱导血压升高的作用显著降低。3、与接受对照抗体处理的WT小鼠相比较,在接受Psgl-1抗体处理后的WT小鼠中Ang Ⅱ诱导血压升高的作用显著降低。4、在Ang Ⅱ诱导的慢性高血压模型中,WT组小鼠和Psgl-1-/-组小鼠基础收缩压水平相近,没有统计学差异。Ang Ⅱ泵入使得两组小鼠收缩压均升高,但Psgl-1--/-组小鼠收缩压升高显著低于WT组小鼠,有统计学差异。5、急性Ang Ⅱ给药处理后,Psgl-1-/-组小鼠的血浆中sP-sel、sE-sel及IL-17水平与WT组小鼠相比均有显著降低。6、急性Ang Ⅱ给药处理后,接受Psgl-1-/-小鼠骨髓细胞移植的小鼠血浆中sP-sel、sE-sel和IL-17水平显著低于接受WT小鼠骨髓细胞移植的小鼠。相似的,Psgl-1抗体处理后的WT小鼠血浆中的sP-sel、sE-sel和IL-17 7水平显著低于对照抗体处理组。7、在IL-17处理后的Psgl-1-/-小鼠中,AngⅡ诱导血压升高的作用明显高于PBS处理后的Psgl-1-/-小鼠。8、全血细胞分析中Psgl-1-/-组和WT组小鼠白细胞总数无明显差别,Psgl-1-/-组小鼠中性粒细胞百分比显著高于WT组小鼠,而淋巴细胞百分比显著低于WT组小鼠。PBS或Ang Ⅱ处理后,WT组小鼠和Psgl-1-/-组小鼠的全血细胞分析均未见显著变化。9、提取小鼠全血白细胞并进行流式细胞分析,发现PBS或Ang Ⅱ处理对Psgl-1-/-组小鼠和WT组小鼠的CD3+细胞百分比没有影响,且Psgl-1-/-组小鼠CD3+细胞百分比低于WT组小鼠。Ang Ⅱ处理与PBS处理比较,可以显著减少两种小鼠的IL-17+细胞数,而且PBS处理或Ang Ⅱ处理后的Psgl-1-/-组小鼠IL-17+细胞均显著少于WT组小鼠。10、慢性Ang Ⅱ给药处理后,WT小鼠血浆中的sP-sel、sE-sel、CXCL-1和MCP-1水平较生理盐水处理组显著升高,但在Psgl-1-/-小鼠中上述指标无明显变化。而且在慢性Ang Ⅱ给药处理后,WT小鼠血浆中的sP-sel、sE-sel、CXCL-1和MCP-1水平明显高于Psgl-1-/-小鼠。11、慢性Ang Ⅱ给药处理后,WT组小鼠肾脏胶原成分较生理盐水对照组显著增加,而在Psgl-1-/-小鼠中肾脏胶原成分无显著变化。12、慢性AngⅡ给药处理后,WT小鼠肾脏中IL-6、ICAM-1、CXCL-1和MCP-1水平较生理盐水处理组显著升高,而在Psgl-1-/-小鼠中上述指标无明显变化。13、慢性Ang Ⅱ给药处理后,WT组小鼠主动脉中膜面积、管壁厚度较生理盐水对照组显著增加,而在Psgl-1-/-小鼠中无显著变化。14、慢性Ang Ⅱ给药处理后,WT小鼠和Psgl-1-/-小鼠主动脉中ET-1、Agtr1b含量较各自生理盐水处理后的对照组显著升高,但两组间未见显著差异。结论:本课题通过对Ang Ⅱ诱导急、慢性高血压小鼠模型的研究,发现Psgl-1缺乏能够显著抑制Ang Ⅱ诱导的血压升高,血液来源的Psgl-1在此过程中起到重要作用。进一步开展的相关机制研究显示:Psgl-1缺乏使得Ang Ⅱ处理后血浆中血管粘附分子sP-sel、sE-sel减少,CXCL-1、MCP-1等炎性相关因子水平降低,抑制了Ang Ⅱ的促炎症反应;Psgl-1缺乏导致促高血压重要因子IL-17水平降低;Psgl-1缺乏能够抑制Ang Ⅱ促进小鼠肾脏胶原成分增加的作用,并抑制Ang Ⅱ介导IL-6、ICAM-1、CXCL-1和MCP-1等炎性相关因子水平上调;Psgl-1缺乏能够抑制Ang Ⅱ促进小鼠主动脉中膜面积、管壁厚度增加的作用,减轻血管重构。上述研究结果阐述了 Psgl-1缺乏抑制Ang Ⅱ诱导的血压升高的作用及机制,提示Psgl-1可能是治疗高血压的新靶点,为抗Psgl-1药物在高血压治疗中的应用提供理论依据。