siRNA靶向沉默ZFX基因对肝内胆管癌细胞生物学功能的影响

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目的 探讨siRNA沉默X染色体连锁的锌指蛋白(ZFX)基因的表达后对肝内胆管癌细胞(HCCC-9810)的增殖、克隆、迁移及侵袭能力的影响。方法 通过脂质体lipofectamine 3000介导转染肝内胆管癌细胞株HCCC-9810,抑制ZFX基因在肝内胆管癌细胞系中的表达,RT-PCR检测ZFX基因的mRNA表达水平的变化,Western blot检测ZFX基因的蛋白表达水平的变化。ZFX基因下调后分别用软琼脂克隆形成实验检测克隆形成能力,CCK-8增殖实验检测细胞增殖情况,Transwell检测细胞的迁移、转移情况。结果RT-PCR及Western blot结果表明与Cell组、NC-siRNA组相比,ZFX-siRNA组有效降低了HCCC-9810细胞系ZFX的mRNA水平及蛋白水平的表达。克隆形成实验显示:ZFX基因沉默后,该细胞系克隆形成能力明显减弱。CCK-8增殖实验证明实验组细胞增殖能力明显降低。Transwell实验显示,Cell组、NC-siRNA组细胞迁移、转移能力明显高于ZFX-siRNA组细胞。各组实验中Cell组、NC-siRNA组之间均未见明显差异。结论 本实验siRNA成功降低肝内胆管癌细胞系HCCC-9810中ZFX基因的表达并证明ZFX的表达降低后与肝内胆管癌细胞的克隆形成、增殖、迁移、转移能力相关。推测ZFX在肝内胆管癌的发生发展中发挥重要的作用,可作为该基因治疗的新靶点。
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