【摘 要】
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目的犬小孢子菌(Microsporum canis),是临床上重要的真菌性皮肤病致病菌之一。在世界范围内广泛分布,对人类健康及动物生产等造成危害。传统的检测方法耗时长准确率低。尽管分子生物学方法缩短了检测时间,但其不仅需具备专业素质的人员操作,且十分依赖试验室仪器。RAA(重组酶介导的等温核酸扩增)能够在39℃左右的等温条件下,2040min内便能够产生大量目的基因扩增。本研究拟建立犬小孢子菌的两
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目的犬小孢子菌(Microsporum canis),是临床上重要的真菌性皮肤病致病菌之一。在世界范围内广泛分布,对人类健康及动物生产等造成危害。传统的检测方法耗时长准确率低。尽管分子生物学方法缩短了检测时间,但其不仅需具备专业素质的人员操作,且十分依赖试验室仪器。RAA(重组酶介导的等温核酸扩增)能够在39℃左右的等温条件下,2040min内便能够产生大量目的基因扩增。本研究拟建立犬小孢子菌的两种RAA检测方法,期望能够建立可以应用于临床快速检测犬小孢子菌的新方法。方法参考犬小孢子菌的U4/U6 snRNA-associated-splicing factor PRP24序列(MCYG08382),设计出可以应用于RAA反应的引物与探针。制备犬小孢子菌DNA阳性标准品。建立了RAA检测方法和LF-RAA检测方法,并对两种方法的反应温度、反应时间、特异性、灵敏度进行评价。同时使用PCR、RAA、LF-RAA检测方法对临床上采集到的78份样品进行检测。将检测结果进行比较,以评价两种RAA检测方法的临床应用价值。结果本研究建立的RAA检测方法最佳的反应温度是24℃39℃,最低反应时间10min,特异性好,最低检测灵敏度能够达到103copies/μL数量级,临床检测总符合率91.03%。本研究建立的LF-RAA检测方法最佳的反应温度是24℃39℃,最低反应时间20min,特异性好,最低检测灵敏度能够达到103copies/μL,临床检测总符合率87.18%。结论本研究建立的两种犬小孢子菌RAA检测方法,反应温度范围广、反应所需时间短、具有很好的特异性和灵敏度,检测结果符合率高等优点。又因为这两种方法对设备要求低、对试验人员操作技术要求低,因此可作为未来临床上检测犬小孢子菌的新方法。
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