【摘 要】
：
目的:口腔鳞状细胞癌（Oral squamous cell carcinoma,OSCC）,是常见头颈恶性肿瘤之一。尽管外科手术结合放疗、化疗等治疗方式已大大改善患者的预后生存,但肿瘤的侵袭与转移仍为患者死亡的重要原因且其相关分子机制尚不十分清楚。有丝分裂细胞因子6（Dedicator of cytokinesis 6,DOCK6）,可作为非典型的鸟嘌呤核苷酸交换因子激活Rho GTP酶进而调控细
【基金项目】
：
国家自然科学基金（No.81372877）； 辽宁省自然科学基金（2020-BS-113）；
论文部分内容阅读
目的:口腔鳞状细胞癌（Oral squamous cell carcinoma,OSCC）,是常见头颈恶性肿瘤之一。尽管外科手术结合放疗、化疗等治疗方式已大大改善患者的预后生存,但肿瘤的侵袭与转移仍为患者死亡的重要原因且其相关分子机制尚不十分清楚。有丝分裂细胞因子6（Dedicator of cytokinesis 6,DOCK6）,可作为非典型的鸟嘌呤核苷酸交换因子激活Rho GTP酶进而调控细胞形态、细胞增殖、凋亡、粘附及迁移等生物学行为。尽管研究表明DOCK6与先天性缺陷疾病发生相关且在胃癌等肿瘤中发挥潜在癌基因作用,但其在口腔鳞状细胞癌中的表达、功能及作用机制尚不明确。因此,本研究拟应用分子生物学技术探究DOCK6在口腔鳞状细胞癌中的表达差异及潜在功能,为深入理解口腔鳞状细胞癌的发生发展过程及临床治疗措施的制定和预后的评估提供分子依据。材料和方法:1、实验材料:口腔鳞状细胞癌细胞系SCC-9、SCC-15、CAL-27;口腔角质永生化细胞系Ha Cat;口腔鳞状细胞癌组织及正常牙龈组织石蜡切片;口腔鳞状细胞癌及配对正常组织标本。2、实验方法:Real-time PCR和Western blot检测分别用于检测MYCT1和DOCK6的m RNA及蛋白质表达水平;公共数据库分析DOCK6在肿瘤和正常组织中的差异表达情况;免疫组织化学染色用于探究DOCK6在口腔鳞状细胞癌患者组织中的表达;细胞划痕实验和Transwell实验用于探究DOCK6对口腔鳞状细胞癌功能的影响;酶联免疫吸附剂测定用于测定敲减DOCK6后,口腔鳞状细胞癌分泌IL8的水平变化情况。3、统计方法:独立样本t检验分析或配对t检验分析用以差异分析,并以平均值±标准误表示;卡方检验或Fisher精确检验用于分析临床参数与蛋白表达间的联系;Kaplan-Meier法和COX风险比例模型法进行单因素和多因素分析分析口腔鳞状细胞癌患者预后风险因素,P值小于0.05认为差异有统计学意义。结果:1、Real-time PCR和Western blot结果显示,与前期芯片结果一致,MYCT1可显著负向调控DOCK6转录及翻译水平（P<0.05）。2、公共数据库TCGA和GEO结果表明,DOCK6在口腔鳞状细胞癌中m RNA表达较正常组织高（P<0.05）。3、Real-time PCR和Western blot结果表明,DOCK6在口腔鳞状细胞癌中m RNA和蛋白表达均高于癌旁配对组织（P<0.05）。4、免疫组织化学染色结果表明,与正常牙龈组织相比,DOCK6在口腔鳞状细胞癌样本中高表达,且提示患者较短总生存期（P<0.05）。DOCK6表达水平与患者性别、T分期未见明显相关（P>0.05）,而与患者年龄、N分期、临床分期及病理分型呈显著相关（P<0.05）。5、采用小干扰RNA技术靶向干扰DOCK6,结果表明小干扰RNA显著降低DOCK6m RNA和蛋白表达水平（P<0.05）。6、细胞划痕实验和Transwell实验结果显示,与对照组相比,沉默DOCK6可有效抑制口腔鳞状细胞癌细胞迁移及侵袭能力。7、生物信息学预测结果显示10余个DOCK6的互作蛋白,并与凝血过程、激活小GTP酶、细胞黏附紧密相关。8、对DOCK6基因通路富集分析结果显示,TGFβ、PI3K-AKT-m TOR等信号通路在高DOCK6水平处被显著富集。9、沉默DOCK6可显著抑制口腔鳞状细胞癌癌细胞IL-8的分泌水平（P<0.05）。10、细胞划痕实验和Transwell实验结果显示,重组IL-8可显著恢复沉默DOCK6对口腔鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响。结论:1、MYCT1抑制DOCK6的m RNA和蛋白表达。2、DOCK6在口腔鳞状细胞癌中高表达,并提示口腔鳞状细胞癌患者不良预后。3、沉默DOCK6可抑制口腔鳞状细胞癌细胞的迁移与侵袭。4、口腔鳞状细胞癌发生发展中,DOCK6可能经由TGFβ、PI3K-AKT-m TOR及蛋白分泌等多个信号通路发挥促癌作用。5、IL-8介导DOCK6促进的口腔鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭。
其他文献
目的:探索骨化三醇（1α,25-二羟维生素D3,1α,25（OH）2D3,以下简称1,25D）对伴2型糖尿病牙周炎大鼠牙龈组织炎症表达的影响以及自噬在此过程中的作用。方法:选8周龄SD雄性大鼠20只,体重220±20 g,16只糖尿病大鼠,采用高脂饲养联合低剂量链脲佐霉素构建,4只非糖尿病大鼠,全部大鼠丝线结扎联合P.gingivalis建立牙周炎模型。模型建立后分为5组,分别为非糖尿病空白组、糖
目的:牙周炎是一种破坏牙齿支持组织的慢性炎症疾病,会造成牙龈、牙周膜、牙骨质和牙槽骨的损害,最终会导致牙齿脱落。牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivals,P.gingivalis）在牙周炎的发病机制中起关键作用。P.gingivalis能够表达多种毒力因子促进其侵入和破坏健康的牙周组织,损害宿主的免疫反应,进而有助于P.gingivalis逃避宿主的免疫防御。巨噬细胞在宿主的
2020年,随着新冠肺炎疫情突如其来并迅速扩散,物资、人员、服务等要素的跨国流动被迫按下"暂停键",产业链供应链遭到破坏,世界经济陷入衰退。受此影响,国际政治经济格局的演进提速换挡,地缘政治风险进一步上升;单边主义、贸易保护主义升温,中美关系持续恶化;原油等大宗商品价格震荡波动,外部市场不确定性日益增多。在这种形势下,
目的:糖尿病与牙周炎之间存在明显的双向关系。维生素D与糖尿病和牙周炎的发生发展密切相关。本研究旨在分析伴2型糖尿病重度牙周炎患者龈下菌群构成并对其与血清25-羟维生素D3[25-hydroxyvitamin D3,25（OH）D3]水平的相关性进行初步研究,以探讨维生素D在伴2型糖尿病牙周炎进程中可能的相关作用。方法:本研究选取对照组及2019-2020年于中国医科大学附属口腔医院牙周科和中国医科
目的:本研究选用革兰氏阴性菌牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis）的内毒素脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）作用于成骨细胞样MC3T3-E1细胞模拟牙周炎的病理状态,体外分析鼠李糖乳杆菌GG（Lactobacillus rhamnosus GG,LGG）超声提取物对牙龈卟啉单胞菌LPS作用下的MC3T3-E1细胞活性和成骨分化的影响,从而探讨LGG超
目的:口面部肌筋膜痛患者可并发睡眠障碍,抑郁和焦虑等,其生活质量受到严重影响。口面部肌筋膜痛发病机制尚不清楚,目前尚无确切的治疗方法。电压门控钙通道α2δ-1（voltage-gated calcium channelα2δ-1,Cavα2δ-1）作为电压门控钙通道的亚基,参与细胞表面钙通道的组装并调节通道的生物特性。现有研究表明,Cavα2δ-1是介导神经病理性疼痛的分子之一。在神经病理性疼痛模
目的:牙本质发育不全等疾病常引起牙本质形成缺陷和牙本质结构丧失,导致牙体组织缺损和牙缺失等,影响患者的咀嚼、发音和美观。牙本质是牙齿的主体结构,由成牙本质细胞分泌的基质矿化形成。因此,研究成牙本质细胞的分化及其调控因素对深入认识牙本质形成的分子机理具有重要意义,并且对进一步的牙本质再生具有一定的实际意义。成牙本质细胞的分化和牙本质的形成受多种信号调控,其中骨形态发生蛋白（Bone morphoge
目的:线粒体是大多数哺乳动物细胞中腺嘌呤核苷三磷酸（Adenosine triphosphate,ATP）的主要提供者,线粒体功能紊乱将导致细胞生理发生改变,包括线粒体的形态变化——裂变和融合,线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential,MMP）下降、活性氧（Reactive oxygen species,ROS）增加,从而导致细胞凋亡。热休克蛋白（Heat S
目的:通过模拟建立单侧颞下颌关节盘不可复性前移位模型和颞下颌关节盘锚固定术治疗后模型,用有限元法探究单侧颞下颌关节盘锚固定术对双侧关节生物力学环境的影响。研究方法:在2018年12月-2020年6月于我院口腔颌面外科门诊就医的颞下颌关节病及相关疾病的患者中,根据纳入及排除的标准,最终选取满足条件的50例患者,其中包括男性17例,女性33例,年龄在12～42岁之间,平均年龄（22.65±7.71）岁
目的:环状RNAs（circ RNAs）是一种新发现的非编码RNAs,在癌症的进展中具有重要作用,但是hsa＿circ＿0007755在口腔鳞状细胞癌（OSCC）中的作用仍不清楚。本实验探究hsa＿circ＿0007755在OSCC中的表达水平及hsa＿circ＿0007755在OSCC的诊断中的临床意义。方法:通过实时定量聚合酶链反应（q RT-PCR）评估30对在OSCC组织样品和CAL27以