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T-2毒素是一种毒性较强的霉菌毒素,可通过污染农作物及饲料导致人和动物中毒。目前,检测T-2毒素最主要的是仪器分析方法。仪器检测方法虽然灵敏度高,但由于技术要求高且不适于现场快速检测,因此限制了其使用范围,由于免疫分析技术具有速度快、操作简单等显著优点,在兽药残留、农药残留、违禁添加物监控检测领域得到广泛应用。本研究拟通过T-2毒素抗原结构分析,制备出人工抗原;并通过动物免疫、细胞融合及阳性杂交瘤筛选制备T-2毒素单克隆抗体;并在此基础上研制出T-2毒素快速检测ELISA试剂盒。本研究的主要内容及结果如下:1.T-2毒素人工抗原的合成与鉴定对T-2毒素化学结构进行分析,针对T-2毒素的化学结构中含有的羟基活性基团,选取牛血清蛋白（BSA）和鸡卵清蛋白（OVA）作为载体蛋白,利用N,N’-羰基二咪唑（CDI）法合成人工抗原T-2-BSA和T-2-OVA,并采用紫外扫描、SDS-PAGE电泳及动物免疫对人工抗原进行了鉴定。结果显示,偶联蛋白的吸收峰与载体蛋白吸收峰没有重叠,但略有偏移,且载体蛋白的迁移速率比偶联后的蛋白要快,由此初步推断人工抗原偶联成功;T-2-BSA所免疫小鼠的多抗血清效价高达1:1×104,半数抑制浓度(IC50)为8.32 ng/mL,说明所制备的人工抗原具有良好的免疫原性,且能诱导动物机体产生针对T-2毒素的特异性抗体。2.T-2毒素单克隆抗体的制备及鉴定选取T-2-BSA免疫小鼠中血清效价高、抑制效价好的小鼠作为融合对象。通过细胞融合技术将小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,利用ELISA筛选体系对融合后的细胞进行筛选,选取阳性杂交瘤细胞进行扩大培养亚克隆,最终筛选出1株可以稳定产生抗T-2毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为4F7,经测定细胞上清效价在1:1×103以上,采用体内诱生腹水法制备腹水,采集的腹水效价高达1:6.4×105,且对T-2毒素的半数抑制IC50可以达到2.28ng/mL,该单克隆抗体的亚型为Ig G1型,亲和常数Ka为1.49×1011 L/mol,与其它霉菌毒素交叉反应率均低于0.01%。3.T-2毒素间接竞争ELISA快速检测试剂盒的制备采用间接竞争ELISA棋盘法方法确定包被原包被浓度及抗体工作浓度,通过对反应时间的优化,建立间接竞争ELISA检测方法从而制备出T-2毒素间接竞争ELISA快速检测试剂盒。在包被原浓度为1:4000稀释,抗体工作浓度为1:32000稀释时所制备的T-2毒素快速检测试剂盒的标准曲线的线性回归方程为y=-0.2742x+0.5939,R2=0.9911,根据方程计算出IC50为2.19 ng/mL,灵敏度可以达到0.129 ng/m L,添加回收率在83.8%94.3%之间,变异系数小于15%且交叉反应率均小于0.01%,在4°C存放180 d未出现质量问题。