【摘 要】
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目的原核表达乳铁蛋白抗菌肽(LfcinB)与免疫调节肽(PGPIPN)融合肽(antimicrobial-immunomodulating fusion peptide,简称AIFP),并初步研究其体外抗菌活性。方法分析LfcinB和P
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目的原核表达乳铁蛋白抗菌肽(LfcinB)与免疫调节肽(PGPIPN)融合肽(antimicrobial-immunomodulating fusion peptide,简称AIFP),并初步研究其体外抗菌活性。方法分析LfcinB和PGPIPN的结构,借助计算机和生命科学软件(Insight II),设计柔性连接臂(GGGGS)连接LfcinB与PGPIPN形成融合肽AIFP;采用重叠延伸PCR技术获得AIFP基因片段;并构建到原核表达载体pGEX-KG中,挑选阳性重组子,经限制性内切酶鉴定后转化到大肠杆菌E.coli BL21;然后用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE及Western-blot方法鉴定表达的融合蛋白;用Glutathione Sepharose 4B亲和层析方法纯化融合蛋白;凝血因子Xa(Factor Xa,简称FXa)酶切融合蛋白经Tricine-SDS-PAGE鉴定得到融合肽AIFP;纸片琼脂糖扩散法初步检测融合肽AIFP抗菌活性。结果经DNA测序证实成功构建原核表达质粒pGEX-KG-AIFP; SDS-PAGE及Western-blot分析显示,GST融合蛋白在E.coli BL21中高效表达;经Glutathione Sepharose 4B纯化后,得到较纯的GST-AIFP融合蛋白;融合蛋白经FXa酶切、Tricine-SDS-PAGE证实得到融合肽AIFP;并初步证明该融合肽有体外抗细菌活性。结论通过原核表达得到融合肽AIFP,其在体外具有抗大肠杆菌活性。
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