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目的：验证柚皮苷是通过PI3K/AKT/GLUT4这条信号通路的作用来改善胰岛素抵抗的。这为胰岛素抵抗相关的疾病治疗提供理论基础和潜在靶点，从而为下一步研究疾病的防治策略、治疗决策和新药开发提供有力的证据。 方法：将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞后，在高糖（葡萄糖）高脂（多种长链脂肪酸混合物，即FFAs）的诱导下，将3T3-L1细胞诱导为胰岛素抵抗模型。筛选出柚皮苷最佳剂量和孵育时间，将不同剂量（0、5μM、10μM、25μM、50μM、100μM）的柚皮苷分别加入3T3-L1细胞，将最佳浓度的柚皮苷加入3T3-L1细胞分别孵育0、4小时、8小时、12小时、24小时和48小时，筛选出最佳孵育时间。分别添加抑制剂，将实验设为五组：1.正常组；2. IR组；3. IR+柚皮苷组；4. IR+PI3K+柚皮苷组；5. IR+AKT抑制剂+柚皮苷组。在诱导好的胰岛素抵抗模型中，依次加入抑制剂LY294002和AKT IV抑制剂，设置正常对照组（control）。使用油红O染色检测3T3-L1细胞诱导后，观察细胞内脂质的聚集情况，确认3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成功。提取脂肪细胞总蛋白，用West ern blo tting法检测各组细胞内AKT、PI3K及其磷酸化蛋白的表达是否上调或下调。 结果：⑴油红O染色显示，在诱导培养基Ⅰ、Ⅱ的培养下，经过10天，3T3-L1细胞诱导分化成了成熟的脂肪细胞；⑵在浓度为33mmol/L的葡萄糖、0.5mmol/L的棕榈酸，24小时的孵育时间下，用Western blotting法检测分化成熟的3T3-L1脂肪细胞内AKT磷酸化程度减少，说明成功构建胰岛素抵抗模型。⑶经对剂量和孵育时间的筛选，柚皮苷的最佳剂量为50μg/ml、最佳孵育时间为24小时。⑷加入抑制剂LY294002和AKT IV抑制剂后，用Western blotting法检测，与control组相比，柚皮柑组PI3K、p-AKT蛋白的表达均下调，有显著性差异(P<0.05)。 结论：本实验成功地建立了以高浓度葡萄糖（33mmol/L）和高浓度棕榈酸（0.5mmol/L）培养诱导的3T3-L1细胞胰岛素抵抗模型，并验证了柚皮苷通过激活PI3K/AKT/GLUT4信号通路来改善胰岛素抵抗。