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以MS基本培养基添加蕙兰菌根浸出液制成的培养基进行分离培养的方法从野生蕙兰根部首次分离到内生细菌。经过分离纯化培养获得纯菌株27株。经过16S rDNA基因序列测序,并与Genbank数据比对,其相似性均在98%以上,分析鉴定结果表明存活的22株菌分为8属14种。分别隶属于伯克氏菌属(Burkholderia)、假单胞菌属(Pseudomonas)、芽胞杆菌属(Bacillus)、Leifsonia属、贪食菌属(Variovorax)、欧文氏菌属(Erwinia)、Duganella属和不动杆菌属(Acinetobacter)。对这些菌株进行分离培养及鉴定有助于理解兰花与微生物之间的相互作用关系,为开发利用这些微生物开辟新的思路。
软腐病是蝴蝶兰在生长时期的重要病害之一,以往报道认为其病原菌为欧文氏菌属细菌。本研究从武汉地区发生的具有典型软腐病症状的蝴蝶兰叶组织中分离到一株新的病原细菌菌株R1,通过菌株R116s rDNA序列分析发现,该致病菌与假单胞菌属中Pseudomonas grimontii菌株的序列相似度高达99.72%;表型特征及生理生化指标测定结果表明:菌株R1与Pseudomonasgrimontii的特征也基本相符。因此,初步将菌株R1鉴定为Pseudomonasgrimontii,科赫氏法则确认该菌株就是本次实验所分到的蝴蝶兰软腐病病原菌。
R1回接实验表明该病原菌发病快、感染率高。本实验采用兰花内生细菌、中草药提取物两种方法对R1进行拮抗。从蕙兰芽部、假鳞茎以及蝴蝶兰根部共分离到内生细菌71株,经过筛选获得8株拮抗作用较强的细菌。编号分别为KR4-7-3、KR11-8-1、KR8-2-2、KR7-10-1、KR7-10-2、KR11-3-2、KR11-4-3。其中最大抑菌圈直径为9.5mm。采用八种中草药提取物对R1进行拮抗,实验结果表明:黄柏、生大黄及甘草的抑菌效果较好,抑菌圈直径最大可达到35mm。