由于近年来大气中臭氧层的破坏,辐射到地面的UV增多,故UV对人类的健康威胁越来越大,过量的紫外线照射以成为危害人类健康的重要环境因素之一。研究发现UV不仅能引发日光性皮炎、皮肤老化、免疫抑制、白内障和皮肤癌等疾病,还能诱导细胞发生凋亡,从而消除受损的细胞避免癌症的发生。UV诱导凋亡的机制具有细胞特异性,对于其诱导细胞凋亡机制的研究成为研究的重点。但在昆虫细胞中的研究比较少。本研究以斜纹夜蛾细胞SL-1细胞为实验材料,对紫外线诱导SL-1细胞的凋亡进行了初步的研究。完成的工作包括以下几个方面: (1)UVC诱导斜纹夜蛾SL-1细胞凋亡 UVC处理斜纹夜蛾SL-1细胞后,可诱导SL-1细胞产生典型细胞凋亡。光镜下可见细胞膜表面突出或形成小泡,细胞破裂成凋亡小体。UVC处理24h后,细胞几乎全部破裂成凋亡小体。DAPI荧光染色显示感染细胞核逐渐形变,直至破裂成小块而被凋亡小体包裹。SL-1细胞处理后DNA琼脂糖凝胶电泳成典型凋亡细胞DNA梯形电泳谱带。PI染色法检测其凋亡率,处理后8hr的凋亡率为47.08%。 (2)细胞内线粒体的变化 流式细胞仪对线粒体膜电位进行检测,结果表明,细胞经罗丹明(Rho-123)染色后在流式细胞仪上检测,处理1小时后即出现荧光强度下降,说明此时膜电位开始下降,并且细胞膜电位逐渐下降且呈时间依赖性。Western-blotting检测调控蛋白Cyto C在细胞质和线粒体中的含量,结果显示SL-1细胞在处理后4小时线粒体中的细胞色素C被释放到了细胞质中,这与很多在哺乳动物细胞中所做的结果相同。 (3)Caspase 3活性的检测 对caspase-3的活性检测,首先用caspase-3特异性序列人工合成荧光底物AC-DEVD-AFC与所提取的细胞裂解液成份反应,置荧光分光光度计上检测,结果显示SfaMNPV感染4小时后即检测到caspase-3的活性,且其活性呈时间依赖性增强。这提示了cytc在UVC诱导昆虫细胞凋亡中可能起重要作用,通过cytc的释放激活下游的效应酶。