【摘 要】
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本研究从中国鲎血细胞RT-PCR 扩增抗菌肽基因,经改造构建原核和真核表达载体,并在大肠杆菌和酵母菌中诱导表达。用Tris-Tricine SDS-PAGE 检测并进一步纯化表达产物,经体外生
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本研究从中国鲎血细胞RT-PCR 扩增抗菌肽基因,经改造构建原核和真核表达载体,并在大肠杆菌和酵母菌中诱导表达。用Tris-Tricine SDS-PAGE 检测并进一步纯化表达产物,经体外生物活性测定表明,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、伤寒沙门菌等具有抑菌作用,尤其对水霉的抑菌效果显著,抑菌环达35mm;对人恶性黑色素瘤细胞(A375)、人宫颈癌细胞(HeLa)有毒性,使其脱离细胞培养瓶壁变成球形,还出现细胞碎片。而对正常鸡胚成纤维细胞(CEF)、猪肾细胞(PK)和地鼠肾细胞(BHK)的生长无影响。同时,还进行了表达中国鲎抗菌肽的基因工程酵母菌在感染高致病性大肠杆菌的雏鸡体内治疗,获得与常规药物羟氨苄青霉素相同的疗效。本项研究弥补了从天然中国鲎中提取抗菌肽缺陷,获得了具有生物学活性的抗菌肽基因工程原核和真核表达株,为用基因工程方法生产无毒副作用、无有害残留、不易使细菌产生耐药性的具有多种生物活性中国鲎抗菌肽奠定了基础。
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