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毛细胞损伤后修复再生是近年来耳科领域研究的重点课题。目前研究表明,哺乳动物前庭上皮损伤后可以不同程度的自发修复,许多信号转导途径参与了这一过程。 目的 探讨哺乳动物前庭上皮损伤后上皮自发修复期细胞增殖的变化及相关信号转导途径的分子机制,为进一步深入研究毛细胞的修复再生提供实验依据。 方法 1.采用溴脱氧尿苷(bromodeoxyuridine,Brdu)体内标记和抗Brdu免疫组化法,观察庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮自发修复期细胞增殖的变化;以免疫组化法检测庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮修复期胰岛素样生长因子-1(insulin like growth factor-1,IGF-1)及其受体(insulin like growth facto-1 recptor,IGF-1R)的表达变化及分布特点,探讨其与前庭上皮细胞增殖的关系及在庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮自发修复中的作用。 2.利用免疫组化方法,观察庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮细胞外信 第四军区大学硕士学位论文号调节激酶 Icyextracellular signal regulated ldnaseo,ERKI厘)的表达变化和分布特点。 3.利用原位杂交组织化学方法,观察庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮信号转导和转录激活因子 3Gignal r删灿er and activator of transcnption3,STAT3)InRNA的表达变化。 结果 1.庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮自发修复期细胞增殖与IGF-l及其受体表达的变化 在正常对照组中无Brdu阳性细胞,各实验组均可观察到Brdu阳性细胞。停药后 id组,Brdu阳性细胞主要位于支持细胞层。7d组阳性细胞最多,支持细胞和毛细胞均有阳性反应。此后阳性细胞逐渐减少,14d组阳性细胞多位于毛细胞层,21d组仍有少量阳性细胞,主要位于毛细胞层u<0.05)。 IGF及 IGF4 在正常成年豚鼠前庭上皮有低水平表达,主要位于胞浆,分布不均匀。庆大霉素损伤后IGF-l及其受体表达增加,以停药后id组表达最强,位于细胞浆中,靠近细胞膜染色强,壶腹峭顶部细胞染色重,阳性细胞主要为毛细胞,壶腹槽两侧的移行上皮中也有阳性反应。随着修复期延长,前庭感觉上皮 IGF-l及其受体表达逐渐减少(P<0.05)。 2.庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮ERKI/2的表达变化 Enga在正常成年豚鼠前庭上皮有低水平表达。庆大霉素损伤后其表达渐增,主要位于胞浆中,阳性细胞主要为毛细胞。壶腹婿顶部染色重,其两侧的移行上皮中也有阳性细胞。停药后7d组表达最强,其后逐渐减少,Zld组仍高于正常(P<0.01)。ERKI和ERK 2的表达变化相似。 3.庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮STATmRNA的表达变化 3 第四军医大学硕士学位论文 STAT3InRNA在正常成年豚鼠前庭上皮细胞中有少量表达,位于靠近细胞膜的细胞浆中。庆大霉素损伤后STAT3mRNA表达增强,id组杂交信号最强。其后逐渐减少,Zld组STAT3InRNA杂交信号强度与正常对照组无显著差异。 结论 1.庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮自发修复期细胞发生增殖,随修复期延长细胞增殖逐渐减少。 庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮中IGF-l及其受体表达增加,内源性的IGF.l通过旁分泌和/或自分泌方式在局部发挥作用。庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮兀F-1及其受体表达高峰早于细胞增殖高峰,提示IGF-l可能是细胞增殖早期强有丝分裂原。 2.庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮中ERKI/2表达增强,其表达变化与细胞增殖活动一致。ERKI/2可能在哺乳动物前庭上皮损伤后前庭上皮自发修复期细胞增殖的信号转导途径中起主要作用。 3.庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮STAT3InRNA表达上调,其时程变化与细胞增殖活动密切相关。STAT3可能在庆大霉素损伤后前庭上皮自发修复早期发挥重要的信号转导作用。