【摘 要】
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目的:（1）通过搜集乳腺癌（Breast cancer,BC）病例标本进行免疫组化实验了解VAMP7、VAMP8基因在BC组织中的蛋白差异表达,分析目标基因与临床病理参数之间的关系,为明确其在BC中的作用提供临床数据支持;（2）通过构建VAMP7、VAMP8基因敲低的稳定转染表达BC细胞系及进行相关细胞功能实验,分析VAMP7、VAMP8基因影响BC细胞系的功能作用;（3）通过多平台搜集及整合BC
【基金项目】
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项目名称:自噬相关基因VAMP7在乳腺癌发生中的分子机制及临床意义,项目合同编号:YCSW2019118,项目来源:广西研究生教育创新计划资助项目,项目起止时间:2019.04-2020.06; 项目名称:miR-449a靶向MAZ抗乳腺癌发生发展并增强tamoxifen抗乳腺癌疗效的作用与机制研究,项目合同编号:2017GXNSFAA198067,项目来源:广西自然科学基金面上项目,项目起止时间
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目的:（1）通过搜集乳腺癌（Breast cancer,BC）病例标本进行免疫组化实验了解VAMP7、VAMP8基因在BC组织中的蛋白差异表达,分析目标基因与临床病理参数之间的关系,为明确其在BC中的作用提供临床数据支持;（2）通过构建VAMP7、VAMP8基因敲低的稳定转染表达BC细胞系及进行相关细胞功能实验,分析VAMP7、VAMP8基因影响BC细胞系的功能作用;（3）通过多平台搜集及整合BC相关微阵列芯片及BC患者临床信息,初步探讨VAMP7、VAMP8基因在BC中mRNA及蛋白水平差异表达、诊断及预后价值、分子机制,与体外实验互相验证VAMP7、VAMP8基因在BC中的作用。材料与方法:1、采用免疫组织化学方法检测VAMP7、VAMP8在100例BC及100例非癌患者的乳腺组织石蜡标本中的蛋白表达水平,探索VAMP7、VAMP8的蛋白表达在BC中的差异表达以及与BC患者临床病理特征之间的关系;2、使用慢病毒构建、嘌呤霉素筛选VAMP7、VAMP8敲低后稳定表达MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR-3 BC细胞系,并进行细胞迁移、细胞增殖、细胞侵袭等功能性实验验证敲低VAMP7、VAMP8基因,减少其mRNA或蛋白水平表达是否能抑制BC细胞的生物学行为;3、通过搜集基因表达综合数据库（Gene Expression Omnibus,GEO）和肿瘤基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）中与BC相关的微阵列芯片数据,提取60套微阵列芯片中VAMP7、VAMP8基因在癌与非癌中的表达值,经过标准化处理,进行BC与非癌组织的mRNA水平表达比对,分析VAMP7、VAMP8基因在BC中的诊断效能,以及与临床参数之间的关系。结果:1、免疫组化结果提示VAMP7、VAMP8的蛋白水平在BC中较非癌组织高,统计分析有意义(PVAMP7<0.001;PVAMP8<0.001),VAMP7与BC患者发病年龄相关（P=0.021）,VAMP8与肿瘤大小相关（P=0.019）,与其他临床病理参数未发现明显关联;2、构建稳转BC细胞系后行RT-q PCR实验证实LV-VAMP7组的VAMP7、LV-VAMP8组的VAMP8 mRNA水平均较空白组和阴性对照组低（P<0.05）,表明已成功构建VAMP7、VAMP8低表达细胞系,细胞功能实验提示VAMP7、VAMP8低表达组的细胞侵袭、迁移能力减弱（P<0.05）,VAMP8基因的敲低减少三种BC细胞系的增殖,VAMP7只在抑制MDA-MB-231系作用明显;3、微阵列芯片共纳入BC样本4172例,癌旁或正常乳腺样本890例,60组芯片共分成20个平台,其中可提取VAMP7数据16组,有11组芯片提示VAMP7在癌组织中较非癌组织高表达（SMD=0.33,95%CI:0.02,0.63）,sROC的AUC为0.7479,敏感度为0.88,特异性为0.33,阳性似然比为1.46,阴性似然比为0.44;可提取VAMP8数据20组,计算SMD为0.61,95%CI（0.26,0.95）,sROC的AUC为0.7662,敏感度为0.86,特异度为0.46,阳性似然比为1.84,阴性似然比为0.37。结论:1、VAMP7、VAMP8蛋白表达在BC组织较非癌组织高,VAMP7与BC发病年龄相关,VAMP8与肿瘤大小相关;2、敲低VAMP7或VAMP8基因的mRNA表达能抑制MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR-3三种BC细胞系的迁移和侵袭能力,VAMP8可抑制上述三种细胞的增殖能力,VAMP7仅在抑制MDA-MB-231增殖作用显著;3、VAMP7、VAMP8基因的mRNA及蛋白水平在BC与癌旁组织中差异表达,两基因在BC组织中高表达提示其具有一定协助诊断BC的能力。
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