【摘 要】
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背景与目的:在临床诊疗中肾脏缺血再灌注损伤（Renal ischemia reperfusion injury,RIRI）是造成肾脏损伤的一种比较常见的病理过程,甚至是导致急性肾功能衰竭的主要原因之一。同时肾脏移植时,RIRI也影响供体肾的功能恢复和后期存活的重要因素。而且RIRI的病理生理机制非常复杂,到目前为止还没有完全弄清。本研究是通过建立小鼠肾小管上皮细胞缺氧/复氧模型,模拟体内肾缺血再灌
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背景与目的:在临床诊疗中肾脏缺血再灌注损伤（Renal ischemia reperfusion injury,RIRI）是造成肾脏损伤的一种比较常见的病理过程,甚至是导致急性肾功能衰竭的主要原因之一。同时肾脏移植时,RIRI也影响供体肾的功能恢复和后期存活的重要因素。而且RIRI的病理生理机制非常复杂,到目前为止还没有完全弄清。本研究是通过建立小鼠肾小管上皮细胞缺氧/复氧模型,模拟体内肾缺血再灌注损伤的过程。研究雄激素受体AR/miR-21信号轴在的小鼠肾缺血损伤中的相互调控作用以及对miR-21靶基因PDCD4（程序性细胞死亡因子4）和凋亡蛋白caspase-3等的调控作用。本研究有望能为临床上治疗肾缺血再灌注损伤提供新的思路。方法:1、制备最佳小鼠肾小管上皮细胞缺氧/复氧模型:用三气孵箱法建立小鼠肾小管上皮细胞TCMK-1缺氧/复氧损伤模型,酶联免疫分析法（ELISA）检测上清液TNF-α含量,流式细胞术检测细胞凋亡等,探讨最佳缺氧/复氧时间。2、小鼠肾小管上皮细胞正常生理情况下和缺氧/复氧条件下细胞,荧光定量PCR检测PDCD4m RNA以及Western-blot检测PDCD4、caspase-3蛋白的表达。3、制备缺氧/复氧模型之前应用pre-miR-21或antagomiR-21预处理细胞,分组（1）Control（2）miR-21-NC组;（3）pre-miR-21组（4）antagomiR-21组;（5）H/R（6）miR-21-NC+H/R组;（7）pre-miR-21+H/R组;（8）antagomiR-21+H/R检测小鼠肾小管上皮细胞经缺氧/复氧后AR和miR-21分子以及PDCD4/caspase-3信号通路的表达情况以及用流式细胞术等检测细胞活力、凋亡情况。4、制备缺氧/复氧模型之前应用AR干扰载体AR si RNA沉默AR基因,分组（1）Control（2）si RNA-NC（3）AR si RNA（4）H/R（5）H/R+si RNA-NC（6）H/R+AR si RNA检测小鼠肾小管上皮细胞经缺氧/复氧后miR-21分子和PDCD4/caspase-3信号通路的表达情况以及流式细胞术等检测细胞活力、凋亡情况。结果:1、小鼠肾小管上皮细胞（TCMK-1）最佳缺氧复氧时间为缺氧4h复氧12h。2、TCMK-1细胞缺氧/复氧会使PDCD4、caspase-3表达升高。3、pre-miR-21会使TCMK-1细胞中miR-21表达升高,AR表达升高,PDCD4和caspase-3表达降低,antagomiR-21会使TCMK-1细胞中miR-21表达降低,AR表达降低,PDCD4和caspase-3表达升高。4、沉默AR基因后,TCMK-1细胞中AR表达降低,miR-21表达降低,PDCD4和caspase-3表达升高。结论:1、过表达miR-21可减轻小鼠肾小管上皮细胞（TCMK-1）缺氧/复氧损伤后的细胞凋亡,干扰miR-21会增加TCMK-1细胞缺氧/复氧损伤后的细胞凋亡,miR-21可能对TCMK-1细胞缺氧/复氧损伤起到保护作用。2、干扰AR会使TCMK-1细胞缺氧/复氧损伤加重,证明AR对TCMK-1细胞缺氧/复氧损伤可能也有一定保护作用。3、AR与miR-21可能存在正反馈关系。
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