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禽流感是由禽流感病毒（Avian Influenza virus,AIV）引起的一种急性、高度接触性传染病,我国流行的禽流感亚型多,流行病学复杂,流行毒株广泛存在于家禽和野鸟中。由于禽流感病毒在复制时缺乏校对机制,因此极易发生基因突变,给该病的防控带来极大挑战。禽流感是当前危害我国家禽养殖业的重大疫病之一,每年给我国家禽业造成极大的经济损失。为了解山东省禽流感病毒的流行情况,本研究于20172019年对山东省规模化肉鸡场及蛋鸡场开展H9N2亚型禽流感流行病学研究,通过临床疑似病例综合诊断及流行毒株检测分析并抽检产蛋鸡群抗体水平,进一步明确山东省规模化鸡场的感染情况及免疫状态,并在此基础上进行风险评估,完善生物安全体系,调整优化疫苗免疫程序。此外,通过对所分离的30株H9N2亚型禽流感病毒8个基因片段（PB2、PB1、PA、HA、NA、NP、NS、M）扩增测序,分析病毒的分子特征及遗传进化规律,以探究山东省现阶段H9N2亚型AIV变异及流行规律,为H9N2亚型禽流感的疫苗研发及免疫防控提供新的技术支持。临床发病情况调查显示,20172019年山东省H9N2亚型禽流感呈散发流行,多为非典型病例,偶见重症病例,主要侵害病鸡的呼吸系统、消化系统和生殖系统。病鸡有不同程度的呼吸道症状,拉白色稀粪,同时产蛋下降,破壳蛋、软壳蛋比例增加。病理组织学观察,重症病例主要表现间质性肺炎及纤维素性肺炎;气管及支气管黏膜卡他性或出血性卡他性炎症;部分病鸡表现病毒性脑炎病变,脑部小胶质细胞增生,神经细胞肿胀,脑血管周围有淋巴细胞浸润;胰腺及淋巴组织坏死;输卵管及肠管发生卡他性炎症。调查显示,禽流感在一年四季均有发病,在寒冷的冬春季多发。在检测的368份疑似AIV病例中,经RT-PCR检测有88份样品为阳性,阳性率为23.91%（88/368）。在20172019年检测的7928份产蛋鸡群血清样品中,H9N2亚型AIV平均抗体滴度为8.87log2,离散度为22.21%,抗体合格率（HI≥6 log2）为93.49%（7412/7928）,抗体水平较高,能有效保护鸡群免受同种类型病毒的感染。对分离到的30株H9N2 AIV全基因测序并进行系统发育分析,发现8个基因片段均属于欧亚谱系,其中HA和NA基因属于Y280-like,PB1、PA、NP和NS基因属于F98-like,PB2和M基因属于G1-like。对HA基因核苷酸同源性分析可知,30株分离病毒之间的核苷酸同源率为92.0%100%,与经典毒株序列（A/chicken/Shanghai/F/1998、A/Quail/Hongkong/G1/97、A/Duck/Hongkong/Y280/1997、A/chicken/Hongkong/Y439/1997）核苷酸同源率为80.4%90.5%,与疫苗参考株（A/Chicken/Shandong/6/96）的核苷酸同源率为87.6%89.2%。对HA基因蛋白裂解位点分析发现,有3株分离毒株为PSRSNR/GL,其余25株为PSRSSR/GL,虽发生一定变异,但仍符合低致病性禽流感病毒分子特征。HA基因抗原位点和受体结合位点分析表明,在第198位（H9编码）氨基酸处出现多样性（A、V、T）,30株均有Q234L（H9编码）突变,具有结合哺乳动物受体的能力。耐药性相关氨基酸位点分析表明,病毒M2蛋白存在V27I和S31N变异,表明病毒对离子通道蛋白抑制剂耐药,NA基因酶活性区域相对保守,病毒对神经氨酸酶抑制剂敏感。对哺乳动物受体结合位点分析发现PB2蛋白有20株分离病毒发生I292V的变异,提示20172019年山东省H9N2亚型AIV感染哺乳动物的能力可能有所增加。交叉血凝抑制结果显示,流行毒株与疫苗毒株的抗原性虽有一定差异,但差异并不显著。2017年以后的分离毒株有形成新抗原群G2的趋势,随着G2抗原群病毒的不断出现,可能会造成原有疫苗的免疫保护力下降。我们要持续监测禽流感病毒的变异情况,避免发生流感大流行。