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目前软组织缺损应用的填充材料最广泛的是固体硅胶和自体脂肪颗粒移植，其中后者由于效果好，来源丰富，无排异反应，但其吸收率高达60-70％，如何克服其不足，则在每年众多的隆乳术和软组织填充术中，使用具有生命力的脂肪组织作填充物是最好的选择。组织工程学的发展为其带来新的希望。组织工程是应用细胞生物学和工程学的原理，研究开发能够修复，维持或改善损伤组织形态和功能的生物替代物的一门科学。组织工程化脂肪是利用组织工程技术，将具有活性的脂肪细胞种植于可降解的支架上，制造出一种与受体组织相容性好、无免疫原性、有活力、耐久性长、可塑性强的人工脂肪。这种理想的脂肪具有自我修复能力，能为正在成长的患者提供增长能力，从而提高移植脂肪的长期疗效。组织工程学的发展为组织带来了新希望，同时为新型整形美容专业充填材料的开发和改进指明了方向。组织工程技术包括：种子细胞的获取，种子细胞均匀种植于三维支架，形成细胞—支架复合物，共同进行培养，组织工程脂肪的体外构建及动物在体实验观察，本实验将脂肪间充质干细胞经成脂诱导后种植于PLGA三维支架，形成脂肪细胞—可降解三维支架复合物，构建组织工程脂肪，并作为填充材料移植于兔背部皮下组织。在不同时间点，从大体、组织染色及扫描电镜观察组织工程脂肪的形成情况。目的：1．了解体外培养的人脂肪间充质干细胞的生物学特性及其体外成脂和成骨的能力。2．研究低温冻存对人脂肪间充质干细胞其牛物学特性的影响，探讨MSCs理想的保存方法。3．本研究在分离纯化、大量扩增人脂肪间充质干细胞的基础上，通过冻存后鉴定其生物学特性有无变化，以探讨这种冷冻方法的可行性。4．研究人脂肪间充质干细胞在可降解骨基质材料聚乳酸-羟基乙酸（PLGA）上的黏附、增殖和分化能力，为进一步体内回植提供研究基础。5．研究以PLGA为支架材料形成的组织工程脂肪作为软组织填充材料的可行性。方法：1．体外培养人脂肪间充质干细胞并传代计数，行成骨和成脂诱导，流式细胞仪检测其细胞增殖周期与表面分子。2．体外分离培养、扩增正常成人脂肪间充质干细胞在5％DMSO-30％FBS-DMEM冻存保护剂条件下，采用二步法低温保存3月，以台盼蓝拒染回收率（TBR）、ADSCs生长曲线、ADSCs表面抗原表达以及其多向分化能力检测，比较冻存对ADSCs生物学特性的影响。3．用常规方法体外培养并扩增人脂肪间充质干细胞，消化细胞并洗涤离心加入10％二甲基亚砜、30％胎牛血清、60％MEM的细胞冻存体系，直接放入-70％冰箱贮存。冻存4、8和12周在37℃水浴复温，通过检测细胞周期、细胞表型和成脂的多向分化潜能，4．等比混合聚乳酸（PLA）和聚乙醇酸（PGA），有机溶剂注模法制备PLGA。体外培养人脂肪间充质干细胞，复合PLGA，通过扫描电镜观察人脂肪间充质干细胞在PLGA上的黏附、增殖，以及在成脂诱导情况下细胞形态的变化。5．实验组：取兔的脂肪间充质干细胞，行体外扩增培养第3代，达到一定数量后成脂诱导1周，接种于PLGA支架上，继续诱导1周，置于兔背部肩胛骨两侧皮下，分别于4、8周从大体和组织学方面观察脂肪形成情况；对照组：单纯以未接种细胞的支架移植于兔背部肩胛骨两侧皮下，于相同时间点进行检测。结果：1．人脂肪干细胞经过体外培养均一的阳性表达CD44、CD106，而CD49d、CD34、CD45和HLA-DR表达阴性。细胞周期分析表明：G0／G1、S和G2／M所占比例分别为79.1％、19.7％和1.3％。分离细胞在诱导体系下可以向成骨和成脂方向分化。2．冻存后ADSCs的增殖能力和向成骨细胞、脂肪细胞分化没有显著影响，与冻存前比较，P＞0.05。3．消化后不经过传统的程序性降温冻存技术，直接-70℃冰箱贮存，其细胞生物学特性无明显改变，细胞仍存在成脂的多向分化潜能。4．合成的PLGA呈多孔状，孔隙率为85％，孔径为100～400um。人脂肪间充质干细胞可在PLGA上黏附、增殖、分泌胞外基质，并可在成脂诱导剂的作用下分化为圆形的成脂样细胞。复合后14天，人脂肪间充质干细胞和胞外基质已将基质材料颗粒完全覆盖。5．实验组植入4周后该复合物在支架中有脂肪形成，并可见细胞突入支架材料中；8周后支架材料继续降解，脂肪组织形成明显，伴有少量血管长入。对照组支架材料逐渐崩解，未见脂肪组织形成。结论：1．脂肪间充质干细胞具有特殊的生物学特点，体外能够向成骨和成脂方向分化。2．采用5％DMSO-30％FBS-DMEM冻存保护液和二步法的冻存体系，可较完整保持ADSCs生物学特性，是深低温保存ADSCs的理想方案。3．人脂肪间充质干细胞悬液直接-70℃冰箱贮存不影响其生物学特性，是冷冻保存一种可行的方法。4．人脂肪间充质干细胞能在PLGA上粘附、增殖，PLGA可作为人脂肪间充质干细胞的载体和组织工程的支架材料。5．以PLGA为支架材料形成的脂肪为组织工程作为软组织填充材料提供了一个好的思路。