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β受体激动剂即我们熟知的瘦肉精,是一类非法使用在肉类制品上,促进牲畜瘦肉生长、抑制牲畜脂肪合成的苯乙胺类药物,最为常见的情况是被非法用于猪的饲喂养殖过程中。人食用饲喂了较大剂量瘦肉精的畜产品后可出现恶心、呕吐、心动过速、肌肉震颤等不良反应,对健康带来严重危害。β受体激动剂作为非法添加物添加进饲料时,其使用量往往是正常治疗量的数十倍之多,并且持续喂药较长时间(通常连续使用3周以上),非法饲养者为了缩短牲畜饲养周期,这些牲畜屠宰前往往没有休药期,这种情况下β受体激动剂在肌肉和内脏器官会产生较高浓度的残留,而且不易被破坏,给食品安全带来巨大隐患。目前对动物组织中瘦肉精残留的检测方法主要采用色谱技术以及免疫分析技术两类方法,但存在各自局限。本文将表面增强拉曼光谱技术特点应用于β受体激动剂的检测当中,建立灵敏度高、简单、快速的β受体激动剂检测新方法以满足监管,特别是现场快速检测需要,主要研究内容和结果如下:1、采用化学还原法,以柠檬酸钠作为还原剂制备了三种不同粒径的金纳米颗粒溶胶以及一种银纳米颗粒溶胶。然后从粒径大小、形状、分布情况对不同纳米溶胶进行表征。初步检测了四种溶胶与β受体激动剂类药物分子结合后拉曼信号的增强效果,通过实验得到三种金溶胶当中加入2mL浓度10mg/mL柠檬酸钠制备出的金溶胶胶体B尺寸均匀、粒度适中、分散性好,与p受体激动剂结合后拉曼信号增强效果优于另外两种金溶胶胶体A和胶体C。然后将银溶胶与金溶胶胶体B对p受体激动剂增强效果进行比较,得到银溶胶与p受体激动剂结合后的增强效果优于金溶胶,因此选择银溶胶作为表面增强活性基底对p受体激动剂进行检测。2、优化表面增强拉曼光谱检测条件,选取了具有代表性的三种p受体激动剂硫酸特步他林(TS)、盐酸班布特罗(BH)、盐酸氯丙那林(CH)为代表进行研究,利用他们具有相同结构部分的特点,找到表面增强拉曼光谱法检测p受体激动剂的共性方法。通过单因素实验得到的表面增强拉曼光谱检测p受体激动剂的最优条件为:银溶胶与待测溶液添加比例3:2,调节pH值为5,NaCl浓度为0.15 mol/L。3、对p受体激动剂水溶液的表面增强拉曼光谱性质进行研究。首先对三种常用p受体激动剂的拉曼光谱特征峰进行指认和归属,确定p受体激动剂类药物的拉曼光谱共性特征峰为800-850cm-1,1050 cm-1,1450 cm-1三处,并以此作为p受体激动剂存在的定性依据。然后以CH为代表,考虑兼顾灵敏性和稳定性的需要,选择800-850cm-1处特征峰为定量分析峰,建立p受体激动剂水溶液浓度与其特征峰拉曼信号强度之间的线性关系用于定量检测。得到p受体激动剂水溶液在浓度1-10 mg/L范围内,特征峰拉曼信号强度与待测物浓度之间关系满足方程Y=2483X-763.2,相关系数为R2=0.997,检测限为0.1mg/L。4、研究了尿液中主要成分对p受体激动表面增强拉曼光谱的影响,建立尿液中p受体激动检测方法。排除尿素分子在1005 cm-1的干扰因素后,选择800-850 cm-1和1450 cm-1处特征峰作为快速鉴定尿液中存在p受体激动剂类药物的定性依据。考虑兼顾灵敏性和排除杂峰干扰的需要,选择p受体激动剂在800-850cm1处的拉曼特征峰信号强度与浓度之间建立线性关系,建立尿液中p受体激动剂的定量检测方法。以CH为代表,表面增强拉曼光谱检测CH尿液体系在浓度1-10 mg/L范围内,存在良好的线性相关关系,其特征峰强度与浓度之间满足方程Y=2113X+6006,相关系数为R2=0.999,最低检出限为0.5mg/L。为了进一步对方法进行评价,对比采用高相液相色谱法建立对p受体激动剂的检测方法。以峰面积对CH浓度建立线性关系,得到线性方程为Y=0.03018X+0.04667,相关系数r=0.999;结果表明CH浓度在0.5-10mg/L时,浓度与峰面积呈良好的线性关系。此方法的最小检出限为0.15mg/L。分别用SERS法和HPLC方法对一批未知浓度的CH盲样进行检测,检测结果具有很好的一致性。最后从前处理、检测限、准确性三个方面将两种方法进行比较,得出表面增强拉曼光谱检测尿液中p受体激动剂具有前处理简单、检测速度快、准确性好的优势。适合作为作为现场快速筛及初步定量的检测手段。