犬圆环病毒(Canine Circovirus，CanineCV)是一种新发现的哺乳动物圆环病毒，2012年首次在美国从犬血清中发现。随后，该病毒陆续在意大利、德国、中国台湾和中国大陆被检出，宿主除了家犬外还有狼、狐、獾等犬科野生动物。临床上，CanineCV感染与犬血管炎、出血性腹泻和胃肠炎有关。到目前为止，关于该病毒流行病学、基因分型、致病性和机制研究仍处于空白。
　　本研究首先根据GenBank中登录的参考毒株序列，设计、合成了2对PCR引物，对采集于广西10个县的926份犬血清样品进行检测。结果在9个县的81份样品检出CanineCV DNA，平均检出率为2.78％-30％，表明该病毒在广西不同地区家犬中呈不同程度流行。
　　本研究完成了24个CanineCV广西毒株的全基因组扩增和序列测定。结果表明，广西毒株基因组长度为2063-2064nt。其中，有16个毒株的基因组长度为2064nt，是本次研究首次发现，该多出的一个碱基位于基因组5端基因间隔区内茎环结构的下游。序列比较显示，广西毒株全基因组核苷酸序列同源性为86.6％-100％，与另外28个参考毒株序列同源性为81.4％-90.5％。其中，ORF2的核苷酸变异程度较大，同源性为74.5％-100％，比ORF1（同源性86％-100％）变异程度更大。
　　为探索CanineCV的遗传关系和进化规律，本研究用所获得的24株广西毒株与28株参考毒株的ORF2与全基因组序列分别构建了NJ遗传进化树，结果表明52株CanineCV可分为两大基因型。进一步采用Grau-Roma等建立的PCV2分型方法进行分析，结果证实CanineCV可分为CanineCV-1和CanineCV-2两个基因型，其中两个基因型内ORF2序列的平均遗传距离分别为0.091（范围从0到0.188）和0.070（范围从0到0.118），而确立基因型的遗传距离阈值为0.090。同时，CanineCV-1可进一步划分为4个亚型(1a、1b、1c、1d)和CanineCV-2划分为2个亚型(2a、2b)，分型阈值分别为0.054和0.053。上述结果表明，CanineCV毒株具有高度遗传多样性，其中CanineCV-1b、2a和2b是本研究新发现的中国独有的基因亚型。
　　进一步对CanineCV衣壳蛋白氨基酸序列进行比对分析，鉴定出第57位、第193-195位、第239-240位和第242位等4个基因型特异性氨基酸残基位点，以及第7位、第14-20位、第83-86位、第148-149位、第148-150位、第149-150位、第208位和第236位等7个亚型特异性氨基酸残基位点。
　　采用RDP4分析，发现了8种可能的CanineCV毒株间基因重组事件，且重组事件分布于整个基因组，涉及ORF1(n=5)和ORF2(n=4)、5-基因间隔区(n=4)和3-基因间隔区(n=3)。而且在每种基因型和基因亚型中都发现有重组情况。
　　选择压力分析发现，复制酶和衣壳蛋白大多数氨基酸位点处于负选择压力下，但分别有49个和71个位点处于正选择压力下。
　　最后，为探索实验室抗原诊断方法和制备抗体，本研究设计一对引物，通过PCR扩增不含编码N端核定位信号序列的衣壳蛋白ORF2部分片段，克隆到表达载体pET28a中构建原核表达质粒pET(28a)-d(1-26)Cap，转化感受态细胞BL21(DE3)，经IPTG诱导，SDS-PAGE和Western-blotting检测，成功实现CanineCV ORF2的原核表达。
　　总之，本研究完成了广西CanineCV的分子流行病学调查及24株广西毒株的全基因组序列测定与分析，国际上首次确立CanineCV的基因分型并发现3个新的基因亚型，鉴定了基因型特异性氨基酸位点，分析了病毒基因重组情况和遗传选择压力，并实现ORF2的原核表达。研究结果为CanineCV遗传变异、检测、免疫和致病机制研究奠定了基础。