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研究表明,天然生物黄酮类物质具有清除自由基、抗菌、抗癌、调节人体免疫系统等生理功能,本文以黄腐酸为原料,研究了黄腐酸中黄酮类物质的提取工艺、纯化工艺,及通过特征颜色反应初步定性了黄腐酸提取物,并同时利用HPLC对五种黄酮类物质进行了分离检测。本研究共分为四章,主要研究内容及试验结果如下:第一章本章阐述了黄酮类化合物的基本性质、生理功能、提取方法及纯化方法,并总结了研究背景、意义、内容及展望。第二章本章建立了超声波法提取黄腐酸黄酮类物质提取工艺。通过单因素试验考察了不同提取剂、料液比、浸泡时间、超声温度、超声时间对黄酮提取效率的影响,在单因素试验结果的基础上,通过设计正交试验优化获得黄腐酸黄酮类化合物的最优提取工艺条件:提取剂为甲醇,料液比为1:14(g:mL)、浸泡时间为2 h、超声温度为51~55℃、超声时间为60 min。该工艺简单方便、可行性强,黄酮提取率较高。第三章本章建立了HP-20大孔树脂纯化黄腐酸中黄酮类物质的方法。通过黄酮颜色反应考察了黄腐酸提取物是否含有黄酮类物质;通过HP-20大孔树脂静态吸附、解析试验,考察了树脂的饱和吸附量、饱和吸附率及解析率;通过吸附动力学研究,考察了上样速度、洗脱剂浓度、洗脱速率对黄腐酸中黄酮类化合物纯化影响,并获得最优纯化工艺。研究结果表明,颜色反应初步定性黄腐酸提取物中含有黄酮类或黄酮醇类物质;HP-20大孔吸附树脂的饱和吸附量、饱和吸附率及解析率分别为3.7 mg/g、87.2%、84.2%,HP-20树脂对黄腐酸黄酮类物质的纯化效果较好,上样速度4 mL/min、洗脱剂浓度为60%乙醇-水溶液及洗脱速率为4 mL/min是纯化黄腐酸黄酮的最佳工艺。第四章本章建立了五种黄酮类物质的HPLC分离检测方法。考察了不同流动相比例、流速、柱温、流动相酸度等因素对色谱分离效果的影响,并得到最佳色谱分离条件;考察了五种黄酮线性相关性、方法检出限、方法精密度及方法稳定性。结果表明,其最佳分离条件:检测波长为260 nm、流速为1.5 mL/min、流动相为V甲醇:V水(含0.05%乙酸)=55:45、柱温为25℃(室温),五种黄酮类物质线性关系良好,检出限均在0.01~0.11mg/L之间,方法精密度的RSD介于0.09~2.30%之间,方法稳定性的RSD在0.81~2.19%之间,此分离检测方法检出限低、精密度较高、稳定性较好,为黄酮类物质的分离与检测提供依据。