论文部分内容阅读
背景干燥综合征（Sjogren syndrome）常见于中年女性，是主要累及全身外分泌腺的慢性进展性自身免疫病。其外分泌腺受累以唾液腺和泪腺为主，此外还可累及呼吸、消化、肾脏、神经等多个系统。干燥综合征外分泌腺的损伤机制多样，包括淋巴细胞大量或灶性浸润导致正常腺体结构的破坏，以及某些抗体所介导的外分泌腺功能异常等。本研究通过检测抗乙酰胆碱3受体（M3R）抗体在干燥综合征患者血清中的阳性率，分析其与临床表现的相关性，探讨其可能的临床应用价值。并利用动物模型研究抗M3R抗体对唾液流率的影响，初步探讨该抗体的致病性。目的分别建立酶联免疫吸附法（ELISA）和免疫印迹法（Western blot）检测抗M3R抗体在干燥综合征、系统性红斑狼疮和健康对照中的阳性率；分析抗M3R抗体在干燥综合征中的临床意义；通过大鼠模型验证抗M3R抗体抑制唾液腺分泌的作用。方法实验对象：自2005年-2007年于北京协和医院入组国际干燥综合征登记网络研究（SICCA）证实为肯定的干燥综合征患者共70例作为实验组；同期住院诊治的系统性红斑狼疮（SLE）患者且除外继发性干燥综合征共49例作为疾病对照组；并以同期健康献血者共76例作为健康对照组。三组间年龄、性别匹配。实验方法：以重组的M3R受体为抗原通过ELISA法检测三组血清中抗M3R抗体，以健康对照组吸光度的（?）+SD为阳性界定，计算ss组和SLE组的抗M3R抗体阳性率；并以重组的的抗原用Western法进一步验证ELISA法检测的可靠性；分析SS组中抗M3R抗体阳性患者较阴性患者在Schirmer试验、BUT、角膜染色、结膜染色、五分钟唾液流率、下唇小唇腺灶性淋巴细胞浸润指数、RF、IgG、抗SSA抗体阳性例数、抗SSB抗体阳性例数间的差异。用亲和层析法纯化抗M3R抗体阳性患者血清中的IgG型抗M3R抗体，以15mg／kg的剂量（7．6mg／ml）注射大鼠尾静脉观察大鼠唾液腺流率的改变，阴性对照用相同浓度和剂量的人IVlO，阳性对照用阿托品（0.125mg／kg）。结果（1）ELISA法检测76例健康组的（?）+SD的值为0.1710+0．0723，以此为阳性界定值计算出SS患者的抗M3R抗体的阳性率为47．10％（33／70），SLE患者组中抗M3R抗体的阳性率为4．02％（2／49），健康对照组中抗M3R抗体的阳性率为14．47％（11／76）；抗M3R抗体在SS患者中的阳性率明显高于SLE组（47．10％vs 4．02％，p<0．05）健康对照组（47．10％vs 14．47％，p<0．05），其间有统计学显著差异。而SLE组和健康对照组间的抗M3R抗体阳性率无统计学差异（4．02％vs 14．47%,P>0．05）。（2）Western法检测出SS患者的抗M3R抗体的阳性率为60．00％（42／70），SLE组巾的抗M3R抗体的阳性率则为12．20％（6／49），健康对照组中抗M3R抗体的阳性率为15．79％（12／76）；抗M3R抗体在SS患者中的阳性率明显高于SLE组（60．00％vs12．20％，p<0．05）和健康对照组（60．00% vs 15．79％，p<0．05），有统计学显著差异。而SLE组和健康对照组间的抗M3R抗体阳性率无统计学差异（12．20％vs15．79％，P>0．05）。Western法和ELISA法的符合率达74．9％。（3）SS组中抗M3R抗体阳性患者IgG（39．97 vs 29．64，p<0．05）、RF值（42．23vs 27．92，p<0．05）及抗SSB抗体阳性例数（31 vs 9，p<0．05）较阴性患者明显增高，其间有统计学显著差异。而抗M3R抗体阳性组与阴性组相比，唇腺活检阳性率、Schirmer试验、BUT、五分钟唾液流率、角膜染色和结膜染色间无显著统计学差异。但是抗M3R抗体阳性组的患者唇腺活检中淋巴细胞灶性浸润（?）3的患者例数较阴性组明显为高（27 vs 10），p<0．05。（4）以亲和层析柱纯化的含抗M3R抗体的人血清IgG（实验组，剂量按15mg／kg，浓度为7．6mg／ml）注射大鼠尾静脉后可减少大鼠的唾液流率（0．0938g vs 0．0748g，P>0．05），阿托品组（阳性对照组）用药后唾液流率较用药前显著减少（0．09327g vs0．02198g，P<0．05），实验组与阳性对照组相比，减少的差值无显著统计学差异（-0．02227g vs -0．07128g，P>0．05）。正常人IVIG组（阴性对照组）用药后唾液流率较用药前显著增加（0．08230g vs 0．43425g，P<0．05）。比较实验组与阴性对照组用药后与用药前唾液流率改变的差值，两组间差异具有统计学意义（-0．02227gvs0.35195g,P<0．05）。结论（1）ELISA和Western法检测SS患者抗M3R抗体阳性率明显高于SLE患者和健康对照者。（2）SS患者中抗M3R抗体阳性组较阴性组IgG值、RF值、抗SSB抗体阳性例数以及下唇小唇腺淋巴细胞浸润为高。（3）纯化的含抗M3R抗体的人血清IgG可部分阻断匹罗卡品刺激大鼠唾液腺分泌的功能。