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药物代谢动力学(Pharmacokineties,PK)是一门定量分析药物在生物体内的吸收、分布、代谢以及排泄规律,运用动力学原理研究血浆药物浓度随时间变化的规律的学科。一个理想的先导化合物不仅要具备较好疗效以及较小毒副作用,也必须具有良好药动学性质。新药开发过程中,药物代谢动力学与药效学、毒理学同等重要,它已经成为药物设计和研发的重要组成部分。我们的前期研究从中药牛膝(Achyranthes bidentata)中发现了天然产物齐墩果酸(Oleanolic Acid)具有一定的骨吸收抑制作用。通过对齐墩果酸的结构改造,获得了系列衍生物,发现了一些具有较好抗骨质疏松活性的化合物。其中,HA-19显示了最好的促进骨形成及抑制骨吸收的双重作用,同时体内外实验发现,此化合物对废用性肌肉萎缩具有明显的抑制作用。为了考察HA-19的成药性,本文对HA-19的药动学性质和组织分布特性进行研究,为今后研究此类化合物活性作用靶器官及可能机制奠定基础。一、HA-19在SD大鼠体内的药物代谢动力学建立了快速灵敏的液相色谱-质谱分析方法(Liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)方法分析测定SD大鼠血浆中HA-19的浓度,探讨HA-19的药代动力学特性。大鼠血浆样品加入内标(8aIS)后,经由甲醇进行蛋白沉淀,离心后分析测定。色谱柱:Xbridge C18(2.1 mm × 150 mm,3.5μm);流动相:0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈,起始比例为80:20,梯度洗脱,流速:0.3 ml/min;温控:30℃。选用电喷雾电离(Electron spray ionization,ESI)离子源,正离子模式,使用多反应监测模式(Multiple reaction monitoring,MRM),HA-19检测离子选择m/z 686.50→628.20;内标检测离子选择m/z 582.45→409.40。结果表明该方法专属性良好,高效、灵敏度高,可以用于HA-19在SD大鼠体内的药代动力学分析。设置尾静脉注射给药以及灌胃给药组,每组6只SD大鼠,给药后测定不同时间点大鼠血浆药物浓度,运用DAS软件拟合计算得出药动学参数。灌胃给药组的血浆药物浓度-时间曲线使用二室模型拟合,峰值Cmax是23.566 μg/l,达峰时间Tmax是4 h,血浆药物浓度-时间曲线下面积AUC(0-t)是121.39 μg/l*h,半衰期tl/2z是2.317 h。尾静脉注射给药组的血浆药物浓度-时间曲线使用三室模型拟合,血浆药物浓度-时间曲线下面积AUC(0-t)是191.599 μg/l*h,快速分布半衰期t1/2α是0.169 h、慢速分布半衰期t1/2β是1.319 h、消除半衰期t1/2γ是26.694 h。HA-19在SD大鼠体内的绝对生物利用度为6.34%。二、HA-19在SD大鼠体内的组织分布特性研究建立LC-MS的方法,测定灌胃给药一次和灌胃给药7周后SD大鼠九个脏器(肝脏、心脏、脾、胃、肾脏、肌肉、脂肪、胰腺、十二指肠)中HA-19的浓度,探讨HA-19的组织分布特性。SD大鼠组织样品加入内标后,经由乙酸乙酯进行液液萃取,离心后分析测定。色谱柱:Xbridge C18(2.1 mm × 50 mm,2.5 μm);流动相:0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈,比例为95:5,等度洗脱,流速:0.2 ml/min;温控:35℃。选用ESI,正离子模式,MRM方式,HA-19检测离子选择m/z 686.60→628.08;内标检测离子选择m/z 582.40→409.75。结果表明该方法专属性良好,高效、灵敏度高,可以用于HA-19在SD大鼠体内的组织分布特性分析。SD大鼠胃肠中的HA-19的浓度较高,其余组织中的浓度较低,大部分组织给药0.5 h或者1h后均达到峰值,说明HA-19在SD大鼠体内分布迅速。HA-19在肌肉组织中浓度相对较高,说明肌肉组织是HA-19主要作用的靶器官之一,为其在体内抑制肌肉萎缩提供了初步证据,同时说明抗骨质疏松症的作用可能与骨头和肌肉之间的相互作用有关。对比灌胃给药一次的测定结果以及灌胃给药7周的测定结果可以发现HA-19在肝脏、脂肪、胰腺中浓度较高,存在蓄积现象。