LIM蛋白质Ajuba增强乳腺癌细胞ERɑ介导的转录调控

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目的:探究LIM家族蛋白Ajuba在雌激素受体ɑ(ERɑ)介导信号通路中的转录调控作用。  方法:通过内源和外源蛋白质免疫共沉淀技术以及GST-pull down实验验证Ajuba和ERɑ间的相互作用。在稳定过表达/敲低Ajuba的T47D细胞系中进行RNA-seq高通量测序分析,寻找Ajuba与雌激素共同调节的ERɑ下游靶基因,并用RT-qPCR技术对RNA-seq结果进行验证。荧光素酶报告基因实验研究Ajuba/ERɑ复合体对ERɑ下游靶基因TFF1启动子的激活作用及其在具体结合位点。CCK8细胞增殖-毒性检测实验检测稳定过表达/敲低Ajuba的T47D细胞和稳定过表达Ajuba的MCF7细胞中Ajuba和雌激素对细胞增殖活性的影响。利用CCK8和RT-qPCR技术检测稳定过表达/敲低Ajuba的T47D细胞和稳定过表达Ajuba的MCF7细胞对他莫昔芬的药物敏感性。  结果:Ajuba和ERɑ之间可不依赖雌激素直接结合,雌激素可增强Ajuba和ERɑ之间的相互作用。RNA-seq检测筛选出一系列Ajuba调控的ERɑ下游靶基因,经RT-qPCR证明RNA-seq结果真实可信。Ajuba/ERɑ复合体通过与ERɑ下游靶基因TFF1启动子上的ERE反应元件结合来激活其转录。Ajuba和雌激素共同促进ER阳性乳腺癌细胞增殖。Ajuba会降低ER阳性的乳腺癌细胞对他莫昔芬的药物敏感性。  结论:Ajuba作为ERɑ的辅激活蛋白正向调节ERɑ介导的信号转导途径。
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