背景和目的新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy HIE)是新生儿期常见疾病之一,常引起新生儿死亡和神经系统的发育障碍。2005年WHO资料显示,全球每年有400万新生儿死亡,而与窒息相关的占23%。即使欧美等发达国家,中重度HIE的死亡率和严重伤残率也高达53%-61%,发展中国家的状况远甚于此。目前缺乏对此疾病的特效治疗方法,临床上主要是稳定内环境的支持疗法,缺乏公认的安全有效的神经保护手段。鼠神经生长因子(mouse nerve growth factor mNGF)是从小鼠颌下腺提取的神经生长因子,是一种较为安全的药物,且毒性很低,大剂量长期用药时会对各脏器系统无明显影响,属于神经系统和循环系统用药,在神经营养因子中最早被发现,目前研究最为透彻的、具有营养、保护神经细胞及促进突起生长等多重生物学功能的神经细胞调节因子,对中枢及周围神经细胞的发育、分化、生长、修复、再生和功能特性的表达均有重要的调控作用。本课题通过建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,早期给予mNGF干预治疗,动态观察大鼠的学习记忆能力,mNGF对新生鼠大脑皮质血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor VEGF)及海马齿状回(dentate gyrus DG)神经丝蛋白(neurofilament protein NFP)表达的影响及其作用机制,通过神经和血管再生两个方面进一步探讨mNGF对HIE神经系统的保护机制,为临床用药提供一定的实验基础。材料和方法1实验动物和分组新生7日龄SD大鼠126只,随机分为假手术组、模型组、治疗组3组,每组再分7个时间点(3h、12h、1d、3d、7d、14d、53d),每个时间点6只。2模型制备和药物应用采用左侧颈总动脉结扎,缺氧2h的方法制备模型。假手术组不给予任何处理；模型组腹腔给予生理盐水；治疗组腹腔给予mNGF。3标本制备术后各时间点(53d除外),将动物麻醉,心脏灌注处死、内固定后取脑,多聚甲醛固定,常规脱水、透明,石蜡包埋,连续冠状切片用于HE染色和免疫组化。4结果判定400倍光镜下观察实验结果,VEGF表达以细胞浆呈棕黄色为阳性细胞,NFP表达以细胞浆、突起、轴突呈棕黄色为阳性细胞,用Qwin550CW图像处理和分析系统分析图像,测定阳性反应物质的平均灰度值。5 Y字迷宫测试术后53d时,使用Y字迷宫测试大鼠的学习能力,连续10次测试中9次正确反应为达到学会的标准,记录动物达到学会标准的次数作为学习能力的指标。24 h后,再重复检测10次,观察有几次正确,以此检测大鼠的记忆保持能力。6统计学分析使用SPSS 17.0统计软件对全部数据资料进行分析,以均数±标准差(x±s)的形式表示数据。采用单因素方差分析的方法,LSD-检验用于各组间的两两比较,以P<0.05为差异有统计学意义。结果1病理结果光镜下,假手术组各时间点大脑组织的结构层次清楚,排列规整,各细胞形态正常；模型组神经细胞排列紊乱,细胞体溶解,胞质淡染,核固缩,有空洞形成；治疗组细胞排列尚且规则,有斑点状神经细胞变性、坏死。2免疫组化结果假手术组VEGF呈持续的低程度表达,造模后治疗组各时间点VEGF的表达均高于模型组,3h-3d治疗组的VEGF阳性区平均积分光密度(IOD)值大于模型组(P<0.05),且高峰提前至3h,两组间7d及14 VEGF表达无统计学差异。HIBD后,3h-1d模型组和治疗组的NFP阳性区平均IOD值均显著低于假手术组(P<0.01),3d、7d及14d治疗组NFP阳性区平均IOD值显著高于模型组(P<0.01)。3 Y字迷宫测试结果模型组大鼠达标所需的次数最多,假手术组最少,24h后模型组记忆率最低,假手术组最高,三组间的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论1.鼠神经生长因子能够改善大鼠的学习记忆能力；2.鼠神经生长因子可能通过增加VEGF的表达,从而诱导内皮细胞增殖,促进新生血管的形成,改善脑组织供氧和供血,减轻脑损伤；3.鼠神经生长因子可能通过增加NFP表达,从而促进轴突的出芽和再生,有利于脑损伤区神经细胞的修复及再生。