论文部分内容阅读
10-羟基-2-癸烯酸(10-Hydroxy-2-Decenoic Acid-10-HDA)是一种单不饱和脂肪酸,在医药和保健领域具有巨大价值,自然界中仅在蜂王浆中发现存在。目前,国内外医药生产厂家已经开始研究10-HDA,并将其用于生产胶囊、片剂以及食品和饮料的添加剂。然而从蜂王浆废渣中提取及化学合成10-HDA难以产业化。因此论文提出利用微生物发酵法生产10-HDA。
根据自然界中的微生物及微生物代谢产物具有多样性的特点,从广大的微生物资源库中寻找产10-HDA的微生物菌株是可行的。因此,通过三年的努力,从自然界中筛选出三株潜力菌株:一株单细胞真菌和两株丝状真菌,并确定出其中一株丝状真菌(命名为BB623)作为进一步研究的对象。随后在以10-HDA作为唯一碳源的培养基上进行菌种优化,获得一株产10-HDA相对稳定的菌株(命名为QYW522)。
论文的研究内容包括:从蜂王浆、蜂体和蜂巢中筛选产10-HDA的微生物菌种的方法,10-HDA的分析方法,10-HDA的提取方法,QYW522的特征及产10-HDA的发酵条件,微生物产10-HDA可能的代谢途径。
首先,论文通过对蜂王浆中10-HDA的分析条件进行研究,确定出菌种在初筛及复筛过程中分别选用薄层层析法、高效液相色谱法及气质联用法进行10-HDA分析。为达到从发酵液中最大提取10-HDA的目的,论文中利用蜂王浆水溶液代替发酵液摸索出最佳的10-HDA提取条件,即pH值3.6、提取温度75℃、蜂王浆水溶液与乙醚比例l:0.75、提取时间60min。
其次,论文对QYW522的生长特征进行了研究。利用显微镜及电子显微镜拍摄了它的菌落、菌丝及孢子特征;研究了它对常用碳、氮源的利用情况,以及常用元素对它生长状况的影响:研究了它的最适生长温度,最适生长pH值,以及传代稳定性。
再次,论文对QYW522的培养基条件及发酵条件进行了研究。确定发酵培养基为(g/L):葡萄糖20、(NH<,4>)<,2>SO<,4> 1.7、酵母膏1、K<,2>HPO<,4> 1.96、MgSO<,4>·7H<,2>O0.5、FeSO<,4>·7H<,2>O 0.01、NaCl 0.024、CaCl<,2> 0.22;发酵条件为:初始pH7.5、温度28℃、转速235r/min、500mL三角瓶装液量80~100mL。
最后,论文对微生物中可能存在的10-HDA代谢途径进行推理,推测ACP-硫酯酶、脂酰脱氢酶、P450酶系对10-HDA的产生起重要作用。