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目的:本项目拟通过研究Fas和人血管抑制素(angiostatin,AG)基因共转染人结肠癌LOVO细胞使肿瘤局部大量表达AG和Fas基因蛋白,以达到抑制肿瘤细胞生长、增殖以及促进细胞凋亡的双重目的,以弥补单独采用血管抑制素和细胞凋亡治疗手段的缺陷和不足。
方法:1构建真核表达载体pcDNA3-FAS和pcDNA3-AG。
2利用脂质体转染技术将二者共转染入人结肠癌LOVO细胞,利用Westernblot方法检测Fas和AG基因的表达;利用MTT法体外观察基因的转染表达对LOVO细胞生长状态的影响。
3将肿瘤细胞接种裸鼠皮下,成瘤后,行瘤内质粒注射。每三天测量肿瘤最长径(A)和最短径(B),并用公式计算肿瘤体积(mm3):体积=AB2/2。依据实验方案收集数据,计算抑瘤率。
结果:1成功构建Fas和AG基因真核表达载体。
2成功构建结肠癌细胞LOVO裸鼠移植瘤模型。
3真核表达载体转染LOVO细胞后,Western检测证实有目的基因的表达。
4通过在相应时间段内对LOVO细胞生长抑制率的检测结果显示:共转染组的细胞生长抑制率并不明显高于单独转染组和对照组。
5在相应时间段内,对裸鼠移植瘤的抑瘤率检测显示:共同注射组明显高于单独转染组和对照组。
结论:Fas和AG基因的联合作用达到了抑制肿瘤细胞生长、增殖以及促进肿瘤细胞凋亡的双重目的,效果明显好与Fas基因和AG基因的单独应用。