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目的 内毒素(LPS)是革兰阴性(G~-)菌细胞外膜的重要组成部分,是介导脓毒症的主要病原分子。已证实中药赤芍具有很强的抗LPS作用,本室已从赤芍中分离出具有拮抗LPS作用的单体化合物1,2,3,4,6-O-五没食子酰-β-D-葡萄糖(PGG),但PGG是一种鞣质,使其潜在的药用价值受到质疑。本研究旨在寻找赤芍中的非鞣质类的抗LPS活性成分。 方法 (1)对已建立的生物传感器技术筛选赤芍中抗LPS有效成分的技术平台进行完善与优化。(2)以生物传感器技术和薄层色谱技术为指导,建立赤芍抗LPS成分的有效提取方法。(3)利用高效液相色谱技术(HPLC)从赤芍中定向分离出具有拮抗LPS作用的活性组分。(4)对分离出的活性组分进行物质属性的鉴定,确定出赤芍中的非鞣质类的抗LPS活性成分,对其进行拮抗LPS活性的药理学评价。 结果 (1)完善了以Lipid A为靶点、应用生物传感器技术筛选赤芍中拮抗LPS活性成分的技术平台,与传统的鲎试剂法比较,具有操作稳定、省时、干扰因素少等优点。 (2)利用生物传感器技术完成了对不同产地赤芍拮抗LPS活性的筛选,确定出产地为四川的赤芍片剂中拮抗LPS活性成分的含量最高。 (3)对四川赤芍的三种煎制方法的比较结果显示,用醇提法的提取效果为最好。 (4)从四川赤芍中定向分离出6个具有与LipidA结合活性的组分,物质属性的检测显示,第4组分的活性物质主要为属鞣质的PGG,其余的5个组分均为非鞣质类物质。对各组分的体内外拮抗LPS作用研究显示:第1、4组分在体内外对LPS均具有较强的中和作用,均能够显著地抑制由LPS介导的RAW264.7细胞释放TNF-α,对致死剂量LPS攻击的动物均具有显著的保护作用。 结论 四川赤芍中含有6个与Lipid A具有特异性结合能力的组分,其中第4组分为鞣质(PGG),其它组分均为非鞣质类物质,在非鞣质的组分中,第1组分与LipidA结合的亲合力最高,拈抗LPS的活性最好。