重组人锰超氧化物岐化酶发酵、纯化工艺及相关膜色谱技术研究

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本文对重组人锰超氧化物歧化酶(rhMn-SOD)的发酵、纯化工艺,相关膜色谱技术进行了研究。 研究发酵罐中采用乳糖诱导高效表达重组人锰超氧化物岐化酶(rhMn-SOD)的方法。乳糖诱导浓度为0.25%,溶氧浓度为40%-60%,用葡萄糖作为补料碳源进行高密度发酵,菌体密度OD<,600>达到28.98,菌体湿重达到60g/L,Mn-SOD活性达到7800u/ml,比活为1057.5u/mg。建立了乳糖诱导rhMn-SOD高效表达的发酵工艺。 用热变性方法替代了传统的硫酸铵分级沉淀蛋白的方法,菌体破碎确定为超声300W 70个循环,粗酶液热变性条件为75℃ 10 min,DEAE上样缓冲液为pH值为9.0的0.02mol/L Tris-HCI缓冲液,洗脱液为含0.1N NaCl pH值为9..0的0.02mol/L Tris-HCI缓冲液。G100纯化后,rhMnSOD比活达到4411.706 u/mg,纯化倍数是粗酶液的5倍。初步建立了一套适合分离纯化rhMn-SOD的较简便的方法,为实际生产奠定了基础。 对疏水膜进行亲水改性,并作为阳离子交换膜进行性能研究。通过丙烯酸羟丙酯聚合改性的聚偏氟乙烯膜及聚四氟乙烯膜不仅具有亲水性,并且可以作为阳离子交换色谱膜对溶菌酶进行分离,最大吸附容量分别为0.0392g/cm<3>及0.0523g/cm<3>为将来色谱膜的进一步研究奠定了基础。
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