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一、背景 肝细胞肝癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)是我国较为常见的一种恶性肿瘤，在我国的肿瘤发病率中排行第三。肝癌的病因迄今尚未完全阐明，既往的许多研究表明，肝癌的发生与环境因素有密切关系，其中乙型肝炎病毒感染、不良生活方式(如吸烟和饮酒)以及暴露于环境致癌物(如黄曲霉毒素)等是导致肝癌的重要原因。但即使在肝癌高发区，接触同样的环境因素仅有少数人发病，乙肝病毒阳性病人中也只有一小部分人发展成肝癌；提示在相同的暴露条件下，个人的易感性因素可能是促使发病的关键。然而什么是中国人肝癌的个体易感性因素目前尚不十分清楚。通过对乙肝病毒导致肝癌的发病机理的研究发现，乙肝病毒基因组中的蛋白HBx是引起肝细胞肝癌的重要蛋白，该蛋白可与细胞中的癌症相关的多种蛋白相互作用；最近人们发现HBx可以与DNA损伤结合蛋白DDB1作用，从而抑制该蛋白与DNA的结合。DDB1是DNA修复系统中核苷酸切除修复途径的重要蛋白，HBx蛋白与DDB1的结合可以降低细胞的核苷酸切除修复能力。对肝细胞肝癌的EST分析也发现DNA修复相关基因DDB2、RAD51C、RAD23A、ERCC1和LIG1表达的下调。在过量表达DNA修复基因MGMT的转基因小鼠中也发现自发性肝细胞肝癌发病率降低。这些提示乙肝病毒在肝细胞癌变过程中，可能是通过影响DNA损伤修复来起作用的，DNA修复基因在肝细胞肝癌的发生过程中起着重要作用。 DNA损伤普遍存在，而细胞也已进化产生复杂的DNA修复体系来修复损伤，保持基因组的完整性。人体重要的DNA修复系统主要有四种，碱基切除修复为其中的一种，其修复过程首先由DAN糖苷酶切除受损伤碱基，形成AP位点；然后由AP裂解酶切开，单链断裂的保护，DNA聚合酶补齐，连接酶连接。hOGG1基因和MBD4基因即为DNA糖苷郑州大学硕士论文DNA修复基因单核昔酸多态与肝细胞肝癌遗传易感性酶基因。本课题应用基因组技术，通过对hoGGI基因和MBD4基因的两个高频单核普酸多态的研究，了解它们与肝癌之间的关系，从而更深入了解肝癌的发病机制，为肝癌预防、诊断和治疗提供理论依据。 二、材料与方法 1、基本资料 本课题采用病例一对照研究，包括96例肝细胞肝癌患者和96例正常对照，病例和对照均来自河南省，所有病例经临床资料和组织病理学检查确诊为肝细胞肝癌，所有研究对象没有直系血缘关系，同时收集每个研究对象的详细人口学资料，吸烟、饮酒和乙肝病毒感染情况。抽取病例和对照的外周血5毫升，加构栋酸钠抗凝，一20“c冻存。 2、方法 提取血样DNA，应用聚合酶链反应(po 1 ymerase Chain reactionPCR)技术，对hOGGI基因多态位点Ser326CyS和MBD4基因的多态位点Glu346LyS进行基因扩增，用凝胶电泳证实待检测片段存在，然后纯化，最后经基因测序，检测h0GGI基因的遗传变异ser326cys和MBD4基因的遗传变异G 1 u346LyS在肝细胞肝癌患者和正常对照中等位基因和基因型的变化，运用Pol yphred软件，对测序结果进行分析，通过统计分析了解它们与肝细胞肝癌风险的关系。 技术路线外周血尽提取DNA尽PCR扩增尽3%凝胶电泳郑州大学硕士论文DNA修复基因单核昔酸多态与肝细胞肝癌遗传易感性尽纯化尽 测序 3、统计分析 以比值比(odds RatioS，ORS)及其95%置信区间(Confideneeinterva1s，c工s)表示相对风险度。所有的统计检验均为双侧概率检验。所用统计软件为statist1CAnalysissystem第6版(SASInsititute，Cary，NC，USA)。 三、结果 不同个体的hOGGI基因第7外显子有三种基因型分别为Cys/eys、eys/ser和 ser/ser。hoGG一基因的等位基因Cys基因频率在肝细胞肝癌病人中要高于正常对照(病例43%，对照31%)，肝癌病例组的Cys/Cys、CyS/Ser、Ser/Ser的基因型频率分别为20.9%、44.2%和34.9%，基因型Cys/CyS和Cys/Ser与Ser/Ser相比在病人中的频率都要高于正常对照，表现出剂量效应.其中携带Cys/Cys基因型的个体患病风险增加约2倍(OR=1.9)。正常人群cys等位基因频率为33.1%，肝癌病例组为43%，肝癌病人要明显高于正常对照。 不同个体MBD4基因第3外显子有e lu/Glu、Glu/Lys、Lys/Lys三种基因型。正常人群Glu/Glu、Glu/LyS、LyS/LyS基因型频率分别为40.4%、46.8%和12.8%。肝癌病例组为41.7%、48.8%和9.5%。等位基因Lys频率在病例和对照分别为33.9%和36.2%，两组比较无显著性差异。 四、结论1、h0GGI基因的等位基因CyS可能增加肝细胞肝癌的患病风险其第7外显子存在ser326CyS多态，可能是中国人肝癌的易感性多态。 2、MBD4基因的遗传变异G 1 u346LyS与肝细胞肝癌的发生无明郑州大学硕士论文DNA修复基因单核昔酸多态与肝细胞肝癌遗传易感性显相关性。3、如果本研究结果得到进一步证实，则通过检测外周血DNAhoGGI基因ser326cys多态，可以为临床早期诊断肝癌提供重要参考并可以筛查肝癌的高危人群。