鸡性别决定的机制目前还不清楚，性别决定基因还未确定，性分化相关基因的研究还有待深入。本研究选择可能与鸡性别决定与性腺分化有关的 ASW和SMARCE1基因进行功能研究；首先引入并优化四环素诱导表达系统，分别在雌、雄鸡胚成纤维细胞中进行 ASW的超表达研究，比较该基因及相关基因的表达变化情况；比较并优化利于鸡胚遗传操作的体外培养技术和基因转移技术；引入逆转录病毒介导的基因转移技术，分别在雌、雄鸡胚中进行超表达研究，分析该基因及相关基因的表达变化情况及性腺组织形态的变化情况。具体研究内容与结果如下：　　1.鸡ASW基因四环素诱导超表达系统的建立　　（1）利用基因重组技术构建 ASW四环素诱导超表达重组载体，组织块贴壁法培养原代鸡胚成纤维细胞，细胞传代后按不同条件进行脂质体转染。结果表明当pBI-EGFP-ASW/pCAGGS-rtTA2S-M2为1：2，质粒DNA/Lipofectemine2000为1：2.5，转染后6h加入终浓度为10μg/mL的诱导剂Dox时，转染效率最高，24h后绿色荧光的强度最强；　　（2）分别提取雌、雄对照组与转染组细胞RNA进行半定量RT-PCR分析。结果表明ASW在雌性转染组的表达显著高于雌性对照组，在雄性对照组中没有表达，在雄性转染组的表达水平接近雌性对照组；ASW的异位（超）表达引起了CYP19A1的上调表达和AMH的下调表达，在雌性中CYP19A1的上调幅度更大，而在雄性中AMH的下调幅度更大；FOXL2、SOX9、DMRT1和ATP5A1W等基因的表达量在ASW超表达后没有明显变化，推测ASW能调控CYP19A1和AMH转录水平的表达，可能有其他因子在其转录后水平或者翻译水平起作用。　　2.鸡胚卵内电穿孔及卵外电穿孔方法的建立　　（1）早期鸡胚分别采用盐酸腐蚀法和胶带剪切法开窗，比较不同日龄后鸡胚存活率，结果显示胶带剪切法开窗的鸡胚在不同时间点存活率均高于盐酸腐蚀法；2.5d的鸡胚开窗后用L形电极进行卵内电穿孔，在4.5d观察GFP主要在鸡胚背侧躯干部位及头部的颊部有表达；　　（2）早期不同日龄鸡胚采用人工合成培养基法培养，结果显示在1.5d取胚存活率最高，表明人工合成培养基法适用于发育极早期鸡胚的研究；1.5d鸡胚用平皿式电极卵外电穿孔后人工合成培养基法培养，24h后观察GFP主要在鸡胚体节部位表达；（3）早期不同日龄鸡胚采用双层培养皿法培养，结果显示在2.5d取胚存活率最高，最长可存活至19日龄，表明双层培养皿法适用于发育早期、中期及后期鸡胚的研究；2.5d鸡胚用L形电极卵外电穿孔后双层培养皿法培养，24h后观察GFP主要在鸡胚体节、腹侧区域表达。　　3.逆转录病毒介导的SMARCE1在鸡胚中的超表达　　（1）利用基因重组技术构建 RCASBP.B-SMARCE1-GFP（ GSR）、RCASBP.B-SMARCE1（SR）和RCASBP.B-GFP（GR）3个逆转录病毒重组载体，脂质体法在 DF-1细胞系进行转染，包装、收集并浓缩病毒后测定病毒滴度为108-109IU/mL；　　（2）分别收集对照组及GSR、SR、GR病毒感染组DF-1细胞进行Q-PCR和免疫荧光检测。Q-PCR结果表明，SMARCE1在SR感染组的超表达效果最显著，对照组中没有SMARCE1、SOX9及CYP19A1的本底表达，SR病毒感染后均有明显表达；有本底表达的 AR、ERα在 SR病毒感染后表达水平显著增加；免疫荧光结果验证了SMARCE1、SOX9及CYP19A1在SR病毒感染后蛋白水平的表达；　　（3）在不同日龄注射病毒比较鸡胚的存活率及感染率，发现在孵化前采用胚盘下腔注射法鸡胚感染率最高。分别收集6.5d、8.5d、10.5d和12.5d对照组与SR感染组鸡胚性腺组织，性别鉴定后进行Q-PCR和免疫组化检测。Q-PCR结果表明，SMARCE1在雌、雄感染组中的表达均显著高于雌、雄正常组，且越到后期差异越显著；SOX9在雌性对照组中没有表达，在雌性感染组中检测到表达；CYP19A1在雄性对照中没有表达，在雄性感染组中检测到表达；FOXL2与CYP19A1的表达变化一致；AR的表达上调，ERα的表达下调；DMRT1和AMH的表达在感染组与对照组间差异不显著。因此，SMARCE1可能通过对FOXL2的上调表达调控CYP19A1的表达；SOX9可能被SMARCE1激活，而DMRT1并不直接参与这个调控过程；SMARCE1-AR路径可能通过estrogen-ER/androgen-AR信号通路被ERα的上调表达所拮抗。SMARCE1最终可能通过对ERα和AR的的调控，促进鸡胚性腺的发育。