目的:体外培养人角膜缘上皮细胞,了解培养细胞的生长情况。分别采用去上皮羊膜和生物羊膜为载体培养人角膜缘上皮细胞28d,观察细胞在不同载体上的生长,分层及与载体的连接情况。探讨以生物羊膜为载体培养角膜缘上皮细胞的可行性。方法:通过倒置显微镜观察组织块贴壁培养法和酶消化法培养角膜缘上皮细胞的生长情况,选用K3抗体和p63抗体运用免疫组化方法鉴定培养细胞中是否含有具有增殖潜力的角膜缘干细胞。运用组织工程方法分别采用去上皮羊膜及生物羊膜为载体,使用组织块贴壁培养法及酶消化法培养角膜缘上皮细胞,通过培养细胞苏木素染色及组织切片HE染色观察细胞的生长及分层,通过透射电镜观察培养细胞与载体的连接。结果:组织块贴壁培养法及酶消化法均能培养角膜缘上皮细胞,组织块贴壁法培养细胞的成功率较高。培养14d含有K3阴性,p63阳性的细胞。采用去上皮羊膜及生物羊膜培养角膜缘上皮细胞均可以获得3～4层形态良好的上皮层样结构,培养28d通过透射电镜可以观察到培养细胞与生物羊膜表面典型的半桥粒连接。结论:组织块培养法及酶消化法均能培养角膜缘上皮细胞,体外培养的上皮细胞中均含有角膜缘干细胞,组织块培养法成功率较高。生物羊膜能够作为培养角膜缘上皮细胞的合适载体。