论文部分内容阅读
养正消积胶囊是由16味中药组成的复方制剂,临床上主要用于不宜手术的脾肾两虚、瘀毒内阻型原发性肝癌的辅助治疗,与肝动脉介入灌注加栓塞化疗合用,可提高化疗的疗效,减轻不良反应。临床研究证实,养正消积胶囊还可用于肺癌、胃癌、结直肠癌、乳腺癌等其他恶性实体肿瘤的辅助治疗。目前,养正消积胶囊的药理作用机制表明该药可通过作用于PI3K/Akt、FAK、HSP27、HGF及其受体c MET等,抑制肿瘤细胞的黏附、迁移、侵袭;通过调节肿瘤相关因子和免疫细胞数量,发挥抗肿瘤作用。迄今,养正消积胶囊的药效物质以及药动学特点尚不明确。本实验拟采用现代化分析技术,检测养正消积胶囊的化学成分组成,寻找其活性成分。通过对后者含量的测定,为养正消积胶囊的质量控制提供实验依据;通过分析活性成分的体内药代动力学特点,为选择适宜的活性成分作为药代动力学标志物以表征药物在体内的变化规律提供参考。目的:建立一套实验方法对养正消积胶囊的化学成分、部分活性成分的含量以及小鼠体内药代动力学特点进行初步探索,为药物质量控制的建立以及药代动力学标志物的选择提供参考。方法:1.GC-MS法分析养正消积胶囊的脂溶性成分取养正消积胶囊粉末加约70oC石油醚,经回流提取、蒸发浓缩后,离心,经聚丙烯滤膜滤过后,取续滤液1μL进样分析。采用GC-MS分析法,以高纯氮气作为载气,程序升温;质谱,EI离子源,全盘扫描方式,扫描范围:m/z 40-650。2.UPLC-Q-TOF-MS法分析养正消积胶囊的水溶性成分取养正消积胶囊粉末加70%甲醇,经回流提取、蒸发浓缩后,离心,经聚丙烯滤膜滤过后,取续滤液10μL进样分析。采用UPLC-Q-TOF-MS法,以15mmol/L甲酸铵水-乙腈为流动相,梯度洗脱方式;质谱,ESI源,采用正、负离子模式,扫描范围:m/z 50-1500。3.HPLC法对养正消积胶囊中部分活性成分含量的测定采用HPLC法对野黄芩苷、黄芩素、白术内酯Ⅱ进行含量测定。分别制备养正消积胶囊溶液和系列混合标准品溶液,经聚丙烯滤膜滤过后,取续滤液20μL进样测定。采用HPLC法,以乙腈-1%醋酸水为流动相,梯度洗脱,设定检测波长为275 nm。在上述实验条件下首先对方法学进行验证,包括专属性、线性、精密度、重复性、24小时稳定性和加样回收率,再对6批样品进行含量测定。4.UHPLC-MS法对养正消积胶囊中部分活性成分的药代动力学研究采用UHPLC-MS法对野黄芩苷、齐墩果酸的小鼠体内药动学进行研究。建立小鼠体内实验模型,采用每只小鼠灌胃给予养正消积胶囊溶液3.90 g/kg,分别于不同时间点摘取眼球采血测定,绘制药-时曲线。应用Win Nonlin6.4软件,采用非房室模型统计距分析法,初步获得药动学信息。结果:1.养正消积胶囊的脂溶性成分的分析结果采用GC-MS分析方法,共鉴定出42种脂溶性成分,主要为挥发油、倍半萜类、酚类和甾醇类等。其中有17种成分找到归属,主要归属于莪术、白术、茯苓、徐长卿。鉴定出的化学成分中含量最多的为丹皮酚,归属于徐长卿,占11.49%;其次为羽扇豆醇,存在于莪术、女贞子等多种中药成分中,总计占3.71%;新莪术二酮,归属于莪术,占1.2%。2.养正消积胶囊的水溶性成分的分析结果采用UPLC-Q-TOF-MS分析方法,共鉴定出38种水溶性成分,主要归属于黄芪、女贞子、人参、灵芝、白术、半枝莲、茵陈。按成分归属,鉴定出灵芝9种成分,黄芪、人参、女贞子各6种成分,半枝莲、茵陈各2种成分,白术1种成分。按化学结构分类,鉴定出三萜类化合物21种、黄酮类11种、环烯醚萜类、内酯类、苯乙醇苷类、有机酚酸类、生物碱类、维生素类各1种。3.半枝莲和白术部分活性成分的含量测定结果采用HPLC分析方法同时测定野黄芩苷、黄芩素、白术内酯Ⅱ的含量。结果表明,6批养正消积胶囊样品中平均含野黄芩苷、黄芩素、白术内酯Ⅱ分别为80.89、2.713、3.708μg/g。4.野黄芩苷和齐墩果酸的小鼠体内药动学研究结果采用UHPLC-MS分析方法初步探索了养正消积胶囊中野黄芩苷和齐墩果酸在小鼠体内的药动学特点。结果如下:野黄芩苷和齐墩果酸进入小鼠体内后被迅速吸收,血药浓度最高值均出现在约10 min。在给药后8 h左右,两种药物存在二次吸收,药-时曲线呈现双峰现象;野黄芩苷和齐墩果酸的半衰期分别约为5.69 h和3.08 h;齐墩果酸被吸收入血的药量和血药浓度低于野黄芩苷,齐墩果酸在体内广泛分布,清除速率较快。结论:1.建立GC-MS法和UPLC-Q-TOF-MS法,分别鉴定出养正消积胶囊的脂溶性成分42种和水溶性成分38种,鉴定出的部分成分具有不同程度的抗肿瘤活性。2.建立HPLC法测定养正消积胶囊中半枝莲和白术部分活性成分的含量。测得养正消积胶囊样品中平均含野黄芩苷80.89μg/g、黄芩素2.713μg/g、白术内酯Ⅱ3.708μg/g。3.建立UHPLC-MS法初步探索了养正消积胶囊中野黄芩苷和齐墩果酸在小鼠体内的药动学特点。