海南龙血树血竭形成的转录组分析

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血竭是由龙血树属植物或其它基源植物产生的暗红色树脂提取而成,为一种传统名贵中药。目前对血竭的研究主要集中在化学成分和药理活性方面,而对血竭的生物合成途径及诱导产生的分子机制鲜有报道。本研究通过对诱导剂处理的海南龙血树茎干的转录组高通量测序,筛选海南龙血树中与血竭合成与调控相关的基因,为进一步研究龙血竭合成代谢机制打下基础。从诱导剂处理后海南龙血树中分离到5个类黄酮化合物(包括了2个查尔酮类、2个黄烷类、和1个高异黄烷类化合物),这些化合物是以血竭中的分离得到的单体标准品鉴定一致,表明了诱导剂可以诱导海南龙血树中血竭的形成。对诱导剂处理后海南龙血树的茎干进行转录组测序,原始出机数据为266.57M个Reads,经过数据过滤和组装,选择81322个大于400bp的Unigene做进一步分析。通过NR、SWISS等数据库的比对,34783个Unigene得到了注释,构建了不同诱导时间点的数字表达谱,使用qPCR对表达谱进行了验证,通过Gene Ontology (GO)和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG)富集分析,富集出与类黄酮化合物含量变化相对应,表达情况发生显著变化的苯丙素合成途径和类黄酮合成途径,并筛选类黄酮化合物合成相关基因22个,编码ABC转运蛋白的基因12个,钙调蛋白基因12个,以及36个编码转录因子的基因等。克隆了4条编码bHLH类型转录因子的基因(DcbHLHl、DcbHLH2、DcbHLH3、 DcbHLH4),并DcbHLH、DcbHLH2、DcbHLH3和DcbHLH4进行了系统进化树和蛋白质二级结构分析,结果显示它们都含有能够识别顺式作用原件E-box的螺旋环螺旋结构。结合模式植物中类黄酮化合物代谢调控研究,推测它们可能参与调控了类黄酮化合物的合成调控。组织定量表明,DcbHLHl、DcbHLH3和DcbHLH4在植物叶片中表达量较高,而DcbHLH2在植物茎部表达量较高,它们在根中的表达都呈最低。DcbHLHs的组织特异性可能与不同功能的类黄酮化合物调控相关。
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