以本实验室筛选并保存的一株产复合酶益生菌黑曲霉 ANO₁ 为出发菌株,经 N⁺多次注入并辅以紫外线复合诱变处理,结合平板透明圈法定向选育,得到高产变异菌株 ANO₂。结果显示,出发菌株 ANO₁酸性蛋白酶、纤维素酶和果胶酶的酶活分别由原来的 71.6 IU.g^-1、141.7 IU.g^-1和 264.8 IU.g^-1相继提高到 996.5 IU.g^-1、940.4 IU.g^-1和 906.5 IU.g^-1。变异菌株 ANO₂经传 5 代培养,产酶特性稳定;利用单因素搜索和正交试验摸索出了 ANO2最佳产酶条件:培养基最佳营养为麸皮 426.8,玉米芯 341.45g,豆粕 341.45g,氯化铵 17.07g,水 1000mL,接种量为 10%;pH 5.5,30℃培养 4 天,。结果提示,N⁺注入可能是一种有效的产酶益生菌选育方法。 通过对 N⁺注入黑曲霉孢子的生物学效应研究发现:真空处理对活细胞有明显伤害,黑曲霉孢子的存活率随着放入真空中时间的延长而呈下降趋势,但随着放置时间的延长孢子的存活率下降速率有所缓慢;同样,孢子存活率也是随着注入剂量加大而迅速降低,但当注入剂量加大到 20×2.6×1014N⁺/cm² 时存活率出现平缓回升,注入剂量超过 50×2.6×1014 N⁺/cm²时存活率又再次开始下降;注入剂量越大,刨子突变率越高,中等注入剂量（20-60）×2.6×10¹⁴ N⁺/cm2可引起较高的正突变率;ESR 谱研究结果表明,N+注入前和注入后都有自由基 ESR 波谱单一峰,且波峰的位置相同,随着注入剂量的增大,孢子内的自由基 ESR 波谱的强度也逐渐增大;SEM 观察发现,未经 N+注入的孢子较为完整、饱满且表面光滑,而经注入后的孢子孢子表面粗糙,可见明显的刻蚀损伤和破壁现象,并且注入剂量越大,伤痕也越深宽。 通过比较原菌株 ANO₁和变异菌株 ANO₂生长特性的研究发现:原始菌株 ANO₁和变异菌株 ANO₂同时接种单菌落于含有麸皮汁的平板培养基中,变异菌株 ANO₂在平板培养基上生长缓慢,35 h 才出现针尖状菌落,而原菌株 25 h 就出现了针尖状的菌落。但变异菌株 ANO₂形成孢子的时间相对较早,有明显透明圈出现,菌褶出现较早;变异菌株 ANO₂的生物量和产酶量呈相关性上升。而原始菌株 ANO₁的生物量在72h 之前是呈上升趋势,而在 72-96h 之间原菌株 ANO₁ 的生物量却有一个平台期,随后开始下降。原菌株 ANO₁酶活虽上升不高,但主要是在生物量稳定后开始上升的。