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脂肪酸是维持人体正常生理功能的必须物质,分为饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸。n-3多不饱和脂肪酸是一类备受医学届关注的多不饱和脂肪酸,已证明它的摄入具有抗肿瘤和防治代谢类疾病的作用。本实验第一部分将健康小鼠分为高饱和脂肪酸饮食组、n-3多不饱和脂肪酸饮食组和对照组,记录每周小鼠进食量和体重,用ELISA法检测小鼠血清脂联素、增食因子A、抵抗素水平,来研究n-3多不饱和脂肪酸饮食对小鼠肥胖程度及相关细胞因子血清水平的影响。结果发现n-3多不饱和脂肪酸饮食组小鼠的肥胖程度明显低于高饱和脂肪酸饮食组小鼠(P<0.05),增食因子A和抵抗素的血清水平明显低于高饱和脂肪酸饮食组小鼠(P<0.05),脂联素的血清水平低于高饱和脂肪酸饮食组小鼠但无统计学差异；n-3多不饱和脂肪酸饮食组小鼠的各项指标和对照组均无统计学差异。因此认为n-3多不饱和脂肪酸饮食和高饱和脂肪酸饮食相比,在为提供小鼠必需脂肪酸摄入的同时,更不易诱导肥胖的发生和发展。虽然摄入n-3多不饱和脂肪酸的生理功效已获得了医学届的认可,但大量获得高纯度的n-3多不饱和脂肪酸,特别是DHA和EPA的成本依然很高。如果将能表达n-3多不饱和脂肪酸的基因或编码能将体内其它物质转化为n-3多不饱和脂肪酸的酶的基因,通过转基因的方法导入到常见的经济动物,如猪、牛、羊体内,使人们在一日三餐中即可进行n-3多不饱和脂肪酸的补充,将是一种解决大量获得高纯度的n-3多不饱和脂肪酸较困难现状的有效途径。在线虫体内发现的fat-1基因,可编码n-6多不饱和脂肪酸脱氢酶,该酶可将n-6多不饱和脂肪酸转化为n-3多不饱和脂肪酸,从而改变体内多不饱和脂肪酸比例。由于小鼠繁育较快,利用基因打靶技术获得转基因小鼠相对容易,因此首先获得fat-1转基因小鼠,对于利用fat-1基因来优化经济动物的性状,从而获得大量含有n-3多不饱和脂肪酸的肉、蛋、乳制品具有前瞻性意义。本实验第二部分,我们对fat-1基因进行密码子优化,增强该基因在小鼠体内的高效表达,把带有启动子和加尾信号的fat-1基因作为一个表达盒整合到通用打靶载体pSSC-10上,之后在小鼠第11号染色体脂肪酸脱氢酶域家族6下游的DNA序列上找到一段基因空白区,依据GenBank上提供基因序列采用Primer5软件设计两对引物,以C57BL/6小鼠肝组织提取的DNA为模板,分别扩增长为3.4kb和1.4kb的片段作为同源短臂(SA)和同源长臂(LA)。再分别将同源长短臂克隆入pSSC-10-fat-1中间载体上fat-1表达盒的两侧,构建出可在细胞水平筛选并剔除筛选标记的基于PNS系统的fat-1转基因小鼠敲入型打靶载体。经酶切鉴定和DNA测序鉴定,我们认为所构建的基因敲入载体pSSC-10-fat-1-SA-LA可以作为下一步转染C57BL/6小鼠胚胎干细胞,进而获得fat-1转基因小鼠的合适载体。