基于“治未病”理论探讨穴位注射对卵巢储备功能减退大鼠PI3K/AKT/FOXO3a表达的影响

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目的:基于中医“治未病”理论,探讨胎盘多肽穴位注射对卵巢储备功能减退(DOR)模型大鼠卵巢组织PI3K、AKT、FOXO3a蛋白表达的影响,探讨穴位注射早期预防对DOR模型大鼠卵巢组织的保护作用和可能机制。方法:将动情周期正常的SPF级12周龄雌性大鼠48只,随机分为空白对照组(空白组)、模型对照组(模型组)、生理盐水肌肉注射组(生肌组)、生理盐水穴位注射组(生穴组)、胎盘多肽肌肉注射组(肽肌组)、胎盘多肽穴位注射组(肽穴组),每组8只。除空白组外,其余5组以雷公藤多苷混悬液50mg/(kg·14d)灌胃制备DOR大鼠模型,造模同时,除模型组外,其余各组均行干预:各穴位注射组于双侧“肝俞”、“脾俞”、“肾俞”、“归来”、“三阴交”及“关元”分别注射生理盐水、胎盘多肽注射液0.02ml;各肌肉注射组分别随机选取大鼠左侧臀部及大腿外侧肌肉5个点,右侧6个点,每点肌注生理盐水、胎盘多肽注射液0.02ml;每周2次,共2周。干预结束翌日,检测各组大鼠体质量、卵巢指数,采用ELISA法测定大鼠血清中卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、抑制素B(INHB)水平,HE染色观察卵巢组织的病理变化,免疫组化法测定卵巢组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、叉头状转录因子O亚族3(FOXO3a)蛋白的表达。结果:⑴与空白组比较,模型组大鼠动情周期紊乱,卵巢指数降低(P<0.05),血清E2及INHB水平降低、FSH水平升高(P<0.01),卵巢组织中各级卵泡数量显著下降,闭锁卵泡则不同程度增加,PI3K、AKT、FOXO3a蛋白表达升高(P<0.01)。⑵与模型组相比,生肌组E2、INHB、FSH水平变化差异无显著性,卵巢组织中闭锁卵泡增多,且闭锁卵泡内较多颗粒细胞胞核固缩或崩解,AKT、PI3K、FOXO3a蛋白表达变化无统计学意义;与模型组相比,生穴组、肽肌组血清E2水平升高(P<0.05),INHB、FSH水平变化差异无显著性,AKT蛋白表达下降(P<0.05),PI3K、FOXO3a蛋白含量均未见显著性差异;生穴组卵巢各级卵泡数目略有下降,黄体数量增加,肽肌组卵巢被膜完整,皮质区各级卵泡数量略微减少,闭锁卵泡增多,黄体增多;与模型组相比,肽穴组卵巢指数升高(P<0.05),血清E2、INHB水平升高,FSH水平降低(P<0.01,P<0.05),卵巢中成熟卵泡增加,黄体数量增多,PI3K、AKT、FOXO3a蛋白表达降低(P<0.01)。⑶与生肌组相比,生穴组、肽肌组血清E2水平升高(P<0.05),INHB、FSH水平变化差异无显著性,卵巢组织中PI3K、AKT蛋白表达降低(P<0.05),FOXO3a蛋白表达变化差异无显著性;与生肌组相比,肽穴组血清E2、INHB水平升高、FSH水平降低(P<0.05),卵巢组织中PI3K、AKT蛋白表达降低(P<0.05),FOXO3a蛋白表达变化差异无显著性;与生穴组比较,肽穴组PI3K蛋白表达降低(P<0.05);其余治疗组组间比较,差异无统计学意义。⑷与空白组相比,肽穴组E2、INHB水平降低、FSH水平升高(P>0.05),AKT、PI3K、FOXO3a蛋白表达升高(P>0.05)。结论:穴位注射胎盘多肽注射液能干预大鼠卵巢储备功能减退,其作用机制可能与调节P13K、AKT、FOXO3a蛋白的表达,改善血清FSH、E2、INHB水平有关。
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