金纳米颗粒的制备及在检测生物分子中的应用

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生物分子是组成生命的基本单位。生物分子可以分为生物大分子和生物小分子,具有维持机体器官系统动态平衡和调节生物体新陈代谢的作用。机体中生物分子含量异常可能引发相关疾病。因此发展早期检测生物分子的方法对临床诊断和治疗具有重要意义。近年来,无机纳米材料中的金纳米颗粒(Gold Nanoparticles,AuNPs)由于具有独特的物理化学性质、生物相容性好、较高的比表面积、易于合成以及稳定性良好等优点,在分析检测等领域得到广泛的关注。基于此,本文着眼于设计基于AuNPs的检测策略,应用于简单、低成本地检测生物分子,主要包括以下三个部分:第一章介绍了生物分子和AuNPs的一些相关背景知识,综述了荧光分析法、比色分析法检测生物分子以及AuNPs应用于检测生物分子的国内外研究现状,由此提出了本论文的选题依据和研究思路。第二章提出了在AuNPs和罗丹明6G(Rhodamine 6G,R6G)存在的条件下,采用荧光法实现快速、灵敏、低成本地检测溶菌酶。当R6G和AuNPs溶液混合时,R6G的荧光由于内滤效应(Inner Filter Effect,IFE)被猝灭。而当溶菌酶先与AuNPs溶液混合时,带正电荷的溶菌酶与带负电荷的AuNPs相结合会导致AuNPs的聚集。之后再将R6G作为荧光指示剂加入到上述混合物中,此时AuNPs和R6G之间的IFE减弱。实验结果显示,随着溶菌酶浓度的增加,R6G的荧光强度增强。在此基础上,可以通过R6G的荧光强度变化来检测溶菌酶,溶菌酶的检测限约为1 ng/mL。定量检测溶菌酶的浓度范围为0.1~10 μg/mL。值得注意的是,该检测方法也被应用于检测尿液中的溶菌酶,结果令人满意。因此,该策略在诊断溶菌酶相关疾病方面具有潜在的应用价值。第三章以AuNPs为比色基底,结合单链DNA(Single-stranded DNA,ssDNA)和纳米氧化铈(nano CeO2),提出了一种新的比色策略来检测双氧水(H202)和葡萄糖。当没有目标物H2O2时,吸附在nano CeO表面上的ssDNA不能修饰AuNPs,AuNPs在盐溶液中聚集,混合溶液的颜色呈现紫色;由于H2O2与nano CeO2之间有更强的结合力,因此当H2O2存在的情况下,吸附在nano CeO2表面上的ssDNA被释放出来,进而修饰到AuNPs表面上阻止AuNPs在盐溶液中聚集,使溶液呈现红色。紫外-可见吸收光谱中在~523 nm处的吸收峰强度逐渐增强,在~625nm处的吸收峰强度减弱。基于此,可以实现检测双氧水。由于葡萄糖氧化酶在葡萄糖氧化过程中会产生H2O2,因此该方法也可用于检测葡萄糖。对于H2O2和葡萄糖的检测限分别为0.21 μM和3.01 μM。此外,该策略还成功地实现了对血清中葡萄糖含量的检测。表明它在H2O2和葡萄糖相关疾病的诊断方面具有潜在的应用前景。
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