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自2014年下半年来,我国安徽、江苏、山东等肉鸭养殖地区的樱桃谷鸭爆发了一种以鸭喙萎缩变短、舌外伸、生长发育障碍等为主要症状的传染病,暂时命名为鸭“短喙-侏儒综合症”（short beak and dwarfism syndrome,SBDS）,民间俗称“鸭大舌病”。研究人员通过病毒的分离鉴定和动物回归试验,确定该病的病原为一种新型鹅细小病毒（Novel goose parvovirus,NGPV）,与鹅细小病毒（Goose parvovirus,GPV）属于同一进化支,两者核苷酸相似率95%以上。本研究通过建立优化一种适合临床检测NGPV抗体的间接ELISA方法,为NGPV的血清学诊断提供一种可靠的技术手段,利用该方法调查了来自不同地区的鸭血清样本,丰富了当下NGPV研究的血清学调查数据。具体研究内容如下:NGPV衣壳蛋白的原核表达及纯化:参照Genbank中NGPV的衣壳蛋白基因序列,分别设计扩增VP1与VP3基因的引物,从实验室保存的NGPV阳性病料中提取病毒D NA,以NGPV阳性DNA为模板扩增VP1与VP3基因,分别将VP1和VP3基因片段连接到pET-32a（+）表达载体上,构建pETVP1与pETVP3重组质粒,将重组质粒转化到E.coli BL21（DE3）表达菌中进行蛋白表达。利用尿素梯度法纯化表达后的DE3菌体蛋白,经BCA蛋白浓度测定试剂盒测定VP1蛋白浓度为2.18μg/μL,VP3蛋白浓度为3.7μg/μL。Western blot试验表明,本试验所表达的VP1和VP3蛋白能够与NGPV阳性血清发生特异反应,不与其他病原的阳性血清及健康鸭血清反应。鸭血清中NGPV抗体检测的间接ELISA方法的建立及优化:分别应用VP1与VP3蛋白作为ELISA方法的包被抗原,在同等条件下检测相同NGPV阳性血清与健康鸭血清,ELISA结果显示VP3蛋白作为包被抗原的P/N值远高于VP1蛋白作为包被抗原的值,选取VP3蛋白作为包被抗原更为灵敏可靠,因此选用NGPV的VP3蛋白作为包被抗原用于建立检测血清中NGPV抗体的ELISA方法。经过条件的摸索与优化,ELISA检测方法的最佳条件为:VP3蛋白包被浓度为2μg/mL;封闭液选择5%脱脂奶粉（250μL/孔）,封闭2h;样本血清进行400倍稀释（100μL/孔）,37℃条件下孵育1.5h;羊抗鸭二抗进行4000倍稀释（100μL/孔）,37℃封闭2h;TMB显色液（100μL/孔）避光作用10min。应用建立的间接ELISA方法检测36份NGPV阴性鸭血清,根据统计学原理计算该ELISA方法的临界值,当血清样品的OD450值S≥0.2024时,样品为阳性;当样品的OD450值S≤0.183时,样品为阴性。对建立的ELISA方法进行特异性检验,结果表明该方法不与鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus,DHV）、禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）、鸭瘟病毒（duck plague virus,DPV）的抗体发生交叉反应。重复性检验结果显示,同一样本在同一批次试验和不同批次的试验中数值差异极小,表明该间接ELISA方法具有良好的重复性。使用间接ELISA方法和中和试验两种方法检测120份血清样品,结果显示这两种检测方法的符合率为85.8%。间接ELISA检测方法的临床应用:本研究应用建立的用于NGPV抗体检测的ELISA方法对山东省5个鸭场共计970份血清样品进行检测。结果表明,5个鸭场的群体NGPV阳性率为100%,每个鸭场的个体阳性率从17.6%-62.6%不等,潍坊个体检出率最高（62.6%）,泰安地区两鸭场的个体检出率较低,其中新泰场检出率为17.6%,肥城场检出率为26.0%,970份血清样品的平均阳性率为39.7%。