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在药物研发的过程中,我们需要对药物的吸收、分布、代谢和排泄进行深入的研究,筛选出安全有效的化合物,剔除无效有害的化合物。其中,化合物代谢机制研究的结果对决定该化合物能否最终成药起着重要的作用。化合物-3是吉西他滨的单磷酸酯前药,数据表明化合物-3能够改善吉西他滨清除率高的缺点,同时也保留了很强的抑制肿瘤细胞增殖的药理活性,但是其具体代谢机制包括主要的代谢产物、代谢酶及其酶动力学数据还不明确。本文旨在通过体外的实验,对化合物-3代谢机制进行研究。通过建立LC-MS/MS方法来测定化合物-3以及其代谢物的含量;对化合物-3在体外微粒体中的稳定性进行了考察,发现化合物-3在大鼠肠微粒体中稳定,但在人肝微粒体和人肠微粒体中不稳定,说明化合物-3在微粒体中的稳定性存在着种属差异,进一步实验证明化合物-3在微粒体中发生了I相代谢反应。为了进一步研究化合物-3的代谢产物,我们使用了高分辨质谱对化合物-3在大鼠和人的血浆,胞质,肠微粒体以及肝微粒体中可能存在的代谢产物进行了鉴定,经过分析验证发现化合物-3在血浆和胞质中没有明显的代谢产物生成,但是在在人肝微粒体和人肠微粒体能够生成三种主要代谢产物,分别为羟基化产物M1,醛类产物M2以及羧酸化产物M3,三种代谢产物随后都被LC-MS/MS方法检测到。为了进一步确定介导化合物-3发生氧化反应的代谢酶,我们使用了CYP重组酶以及各CYP450酶的抑制剂进行确证。研究结果表明,在CYP2D6、CYP3A4、CYP2B6和CYP2C8重组酶体系中能检测到少量代谢产物M1的生成,而在CYP4F2中,代谢产物M1的生成量很明显,同时原形化合物-3的含量显著降低,同时抑制试验也表明CYP4F2的特异性抑制剂HET-0016能够明显的抑制化合物-3在HLM和CYP4F2重组酶体系中的代谢。酶动力学研究是药物代谢研究过程中重要的一部分,在对化合物-3在人肝微粒体以及CYP4F2的酶动力学研究发现化合物-3不仅是CYP4F2的底物,同时其对CYP4F2还存在底物抑制作用。选用帕呋拉定作为CYP4F2的底物,发现化合物-3对CYP4F2有着很强的抑制作用,IC50=0.12μM,同时也发现帕呋拉定对对CYP4F2也有着很强的抑制作用,IC50=0.28μM。综上所述,化合物-3在人肝微粒体中能够被代谢,其中CYP4F2对化合物-3在人微粒体中发生I相代谢起到了重要的作用,在CYP4F2的作用下,化合物-3首先被氧化生成M1（醇）,紧接着又被进一步氧化生成M2（醛）,最终氧化生成了M3（羧酸）。同时化合物-3对CYP4F2有着很强的底物抑制作用,因此实验及应用过程中需要考虑到可能存在的药物与药物相互作用的影响。