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目前有许多研究表明,吲哚或含有吲哚类结构的化合物对许多肿瘤细胞表现出良好的生理活性。另外,α-亚甲基-γ-丁内酯结构单元在许多天然产物中广泛存在,表现出较好的抗肿瘤活性。因此,利用其显著的生理活性特点,将α-亚甲基-γ-丁内酯结构单元和吲哚杂环结合并进行结构修饰,合成了一系列新型吲哚类化合物。在本课题中,经过我们前期的实验结果发现新型吲哚类化合物D-3对胃癌细胞呈现出显著的生物活性。因此,本文主要研究了D-3对胃癌细胞的抗肿瘤作用机制。其主要研究结果如下:1.MTT法检测D-3对胃癌细胞的生物活性,结果显示D-3对胃癌细胞(MGC803,HGC27以及SGC7901)有抑制增殖作用,其中对MGC803细胞和HGC27细胞抑制作用最显著,但对人胃正常上皮细胞GES1无明显毒性,证明D-3对胃癌细胞表现出细胞毒选择性作用。2.为了确定D-3诱导的胃癌细胞死亡是否与细胞凋亡有关,我们用流式细胞术检测得出D-3诱导了MGC803和HGC27细胞凋亡,并且当D-3的浓度逐渐递增时,MGC803和HGC27细胞的凋亡率逐渐增高,证明D-3以浓度依赖的方式诱导胃癌细胞凋亡。3.为了确定D-3诱导的胃癌细胞凋亡是否依赖于Caspase蛋白家族,我们利用流式细胞术以及Western Blot检测得出D-3可以激活Caspase3、9,另外,Caspase的全酶抑制剂z-VAD-fmk可以部分逆转D-3诱导的胃癌细胞凋亡,证明D-3可以诱导胃癌细胞发生Caspase依赖性凋亡。4.为了确定D-3诱导的胃癌细胞凋亡是否通过线粒体途径,我们利用流式细胞术以及Western Blot检测得出D-3诱导线粒体膜电位下降,上调Bax、Bad等以及下调Bcl-2、XIAP等,这些结果证明D-3通过线粒体途径引起胃癌细胞凋亡。5.细胞凋亡通常在死亡配体与相应受体如DR4和DR5结合后发生。我们发现经D-3处理的MGC803细胞中DR5和DR4明显上调,并且本文中引入DR5表达下调的MGC803细胞株,分别用D-3(4μM)作用于野生型MGC803细胞和DR5-/-型MGC803细胞,结果发现降低DR5的表达可以部分阻D-3诱导的细胞死亡,部分逆转D-3引起的凋亡蛋白表达变化。我们还发现D-3诱导的线粒体膜电位下降在DR5-/-型MGC803细胞中部分逆转。结果证明DR5与D-3诱导的细胞凋亡和线粒体途径有关。6.利用流式细胞术检测胃癌细胞中ROS的水平,可以发现ROS在胃癌细胞内逐渐积累,并且核转录因子Nrf2由细胞质转移到细胞核中参与细胞保护途径;另外,为了进一步检测ROS对胃癌细胞的影响,我们使用ROS抑制剂NAC处理胃癌细胞,研究发现NAC可以完全逆转D-3诱导的胃癌细胞凋亡。综上所述,本论文研究并证实了吲哚类化合物D-3对胃癌细胞的促凋亡作用机制,为抗肿瘤药物的开发提供重要的理论依据。