应用液质联用技术分析人参加工炮制品活性成分差异

来源 :长春中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:caory
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目的:应用超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用技术(UPLC-QQQ-MS)测定人参中主要活性成分皂苷和寡糖含量,以此为依据评价鲜人参的不同生长环境(平地栽培和林地种植)和不同贮藏时间(0-11周)对其加工炮制品生晒参和红参中皂苷和寡糖的影响。
  方法:采集四年生鲜人参,一部分经干燥加工为生晒参,一部分经蒸制为红参。应用UPLC-QQQ-MS技术测定生晒参和红参中20种人参皂苷和9种人参寡糖的含量,并应用多元统计分析对数据进行处理。
  人参寡糖固相甲基化制备方法,采用NaOH为填料制备固相甲基化柱,以CHI3为甲基化试剂,在课题组前期研究工作基础上,进一步优化固相甲基化条件,将寡糖进行甲基化衍生后,利用UPLC-QQQ-MS技术检测人参寡糖甲基化产物进行定量分析。
  结果:平地栽培和林地种植人参中皂苷和寡糖对比分析结果表明,皂苷和寡糖成分在不同生长环境下存在显著差异。原人参二醇型(PPD)皂苷中Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd在生晒参中含量高于红参中的含量,且其在平地栽培样品中含量明显高于林地种植样品,Rg3、F2在红参中含量高于生晒参,Rk1存在于红参中而生晒参中未含有,三醇型皂苷Re、Noto R1、Rg1、Rf和齐墩果酸型(OLE)皂苷Ro均在平地栽培样品中含量较高,三醇型皂苷Rg2、Noto R2、F3、F1、Rh1在红参中含量高于生晒参,平地栽培和林地种植样品中含量相差较小。与寡糖对照品相对保留时间和质谱碎片信息比对,在人参中共检测到6种还原寡糖(麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖)和3种非还原寡糖(蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖),来源于林地种植的人参加工炮制品中9种寡糖单体含量均高于平地栽培人参,其中麦芽三糖、麦芽五糖、麦芽六糖、蔗糖和蔗果四糖5种寡糖在不同生长环境下含量差异较明显。因寡糖水解和美拉德反应,6种还原寡糖和3种非还原寡糖含量均在生晒参中高于红参。
  不同贮藏时间鲜人参的加工炮制品中皂苷和寡糖对比分析结果表明,随贮藏时间的变化,人参皂苷和人参寡糖均呈现一定的变化规律。在鲜人参贮藏2周时,制得的生晒参中14种人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rd、Rg1、Rg3、F2、Re、Noto R1、Rf、Rg2、F3、Rh1、F1和红参中12种人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rd、Re、Noto R1、Rg2、F3、F2、Rh1、F1、Rg3的含量较高。Noto R2和Ro在贮藏1周时生晒参和红参中含量最高,均呈现先升高后降低的趋势。人参皂苷Rc在贮藏0周时生晒参和红参中含量最高,并且随着贮藏时间的延长生晒参和红参中含量均有所降低。Rk1为红参中特有皂苷,在贮藏2周时含量最高。由不同结构类型皂苷总含量分析可见,生晒参和红参中总皂苷含量、原人参二醇型皂苷(PPD)和原人参三醇型皂苷(PPT)总含量均在鲜人参贮藏2周时达到最大值,且随着贮藏时间的延长皂苷总含量随之降低。在鲜人参贮藏0周时,加工炮制的生晒参和红参中麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖和麦芽七糖6种还原糖含量较高,随着贮藏时间的增长,含量逐渐降低。蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖3种非还原糖随鲜人参贮藏时间的增长含量升高。9种寡糖总含量在贮藏0周和1周时较高,随贮藏时间的延长,寡糖总含量整体呈现降低的趋势。
  结论:应用UPLC-QQQ-MS技术,建立同时测定20种人参皂苷成分的UPLC-QQQ-MS方法;并对寡糖固相甲基化方法进行优化,建立测定人参中9种寡糖含量的方法,为评价鲜人参的不同生长环境和不同贮藏时间对其加工炮制品生晒参和红参中皂苷和寡糖的影响提供了方法依据。平地栽培和林地种植两种人参种植方式对人参加工炮制品中皂苷和寡糖含量影响较大,平地栽培的人参其加工炮制品中人参皂苷含量较高,而寡糖含量较林地种植低。鲜人参的贮藏时间对其加工炮制品影响显著,4℃下贮藏时间在0周、1周、2周和3周时的鲜人参其加工炮制品中皂苷和寡糖含量均较高,为保证人参的品质,使其发挥更好的药用价值,建议鲜人参的贮藏时间不宜超过3周。
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