两种蓝藻对WSSV潜伏感染对虾的影响

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在以往的对虾养殖生产跟踪调调研中,发现虾池藻相结构及变化与虾病发生有一定相关性,虾池优势蓝藻与养殖对虾疾病的爆发存在着某些方面的联系,可能成为WSS爆发的潜在危机。但虾池优势微藻、WSSV、养殖对虾三者之间具有怎样的关系?相关的研究报道尚鲜见。本研究以虾池的三种优势微藻(蛋白核小球藻、铜绿微囊藻,绿色颤藻)为对象,研究了三种优势微藻与游离WSSV的关系、三种优势微藻对对虾的影响、两种优势蓝藻对WSSV感染对虾的影响。主要内容如下:1.三种虾池优势微藻与环境游离WSSV的关系采用BG11培养液对铜绿微囊藻、绿色颤藻和蛋白核小球藻进行培养,三种微藻分别设置高密度组、中密度组、低密度组,同时设置对照组(不加藻)。在各实验组的培养液中分别加入WSSV粗提液,使WSSV初始浓度为4.32×105copies/ml。分别在第2h,24h,72h,120h吸取藻液,离心分离上清,沉淀的藻体用PBS重悬,以荧光定量PCR检测上清及藻体悬浮液中的WSSV拷贝数,同时计算藻细胞数量。采用偏相关分析法分析藻体WSSV量、上清WSSV量及藻细胞数量的关系。结果发现,2h时,铜绿微囊藻、绿色颤藻和蛋白核小球藻三种微藻的高、中、低密度组上清WSSV量均为105copies/ml,高、中、低密度组藻体WSSV量分别为104copies/ml、104copies/ml和103copies/ml。24h时,三种微藻的高、中、低密度组上清的WSSV量分别降低了98.1%、97.9%、87.6%,高、中密度组藻体的WSSV量分别降低了98.6%、90.1%,均较2h时降低了一到两个数量级,降低幅度均达到显著(P<0.05),低密度组藻体WSSV量降低量不显著(P>0.05)。72h时,各组上清和藻体的WSSV量继续减少,绝大部分游离WSSV已消失。偏相关分析发现,藻体携带WSSV量与藻细胞数量无显著的相关关系(P>0.05)。各组的WSSV总量均呈持续下降趋势,其中各密度微藻组WSSV总量在24h内降低至104copies/ml~103copies/ml,对照组仍为105copies/ml;各密度微藻组WSSV总量在72h内降低至103copies/ml,对照组仍为104copies/ml,微藻组总WSSV量降低速度均比对照组快。结果表明,铜绿微囊藻、绿色颤藻、蛋白核小球藻均能够携带少量的WSSV,其携带量随时间的延长而不断减少,藻体WSSV携带量与藻细胞数的相关性不显著,三种微藻均能够加快水体游离WSSV数量的消减。2.三种虾池优势微藻对对虾的影响实验设置1.2×106cells/ml的铜绿微囊藻、绿色颤藻、蛋白核小球藻的活藻组及死藻组和池塘水组、对照组共8个组。其中,池塘水组直接使用对虾养殖池塘水体,含有较丰富的有机质和约104cells/ml的微藻(主要为栅藻、小球藻、平裂藻等);三种微藻的活藻组及死藻组和对照组均使用经沉淀池处理后的水源,含有机质少,未发现微藻;对照组不加微藻。各组均放入10尾经检测WSSV阴性的凡纳滨对虾,于每天9:00、15:00、22:00检查各组死虾情况,并计算对虾累计死亡率。结果显示,铜绿微囊藻活藻组和死藻组对虾累积死亡率同步上升,均显著高于池塘水组和对照组。42h时,活藻组和死藻组对虾死亡率分别达到了94%和87%,而池塘水组对虾死亡率为37%,对照组仅为3%;90h时,活藻组和死藻组对虾死亡率达到100%,池塘水组和对照组对虾死亡率仅为50%和13%。绿色颤藻活藻组和死藻组对虾累积死亡率几乎同步上升,144h时活藻组、死藻组对虾死亡率均接近80%,明显高于池塘水组的57%和对照组的23%。小球藻活藻组对虾死亡率与对照组情况相似,死藻组对虾死亡率上升较快,144h时,活藻组对虾死亡率仅为23%,死藻组达到了70%。实验过程中,各组活藻细胞均基本保持初始密度,水体pH、温度和溶解氧均在对虾适宜的生存范围内。结果表明,铜绿微囊藻、绿色颤藻的活藻环境和死藻环境均会对对虾造成胁迫,加速对虾死亡,蛋白核小球藻的活藻环境不会对对虾产生不良影响,但死藻环境会加速对虾死亡。3.两种虾池优势蓝藻对WSSV感染对虾的影响设置1.2×106cells/ml的绿色颤藻、铜绿微囊藻活藻组和死藻组、阳性对照组、阴性对照组。活藻组、死藻组及阳性对照组各放入WSSV人工注射感染对虾,阴性对照组放入经检测WSSV阴性对虾。于每天9:00、15:00、22:00检查各组死虾情况,并计算对虾累计死亡率。结果显示,各组对虾累积死亡率均呈逐渐上升趋势。绿色颤藻活藻组和死藻组的对虾死亡率在63h以后迅速上升,144h时活藻组对虾死亡率达到96%,死藻组为89%,阳性对照组为64%,阴性对照组为11%。铜绿微囊藻活藻组和死藻组对虾死亡率在52h以后迅速上升,两组的上升趋势一致,144h活藻组对虾死亡率达到82%,死藻组为89%,阳性对照组为64%,阴性对照组为31%。结果表明,绿色颤藻、铜绿微囊藻的活藻环境和死藻环境均加速了携带WSSV对虾的死亡,两种蓝藻与WSSV的潜伏感染对对虾形成双重胁迫,增强对对虾的毒害。
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