丹参、美托洛尔对大鼠心肌缺血坏死区c--kit、CD34阳性心脏干细胞修复作用的影响

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研究背景近几年,缺血性心脏病的发病率呈现逐年上升并渐趋年轻化的趋势,外科治疗、药物和介入治疗只能改善局部血液供应,提高存活心肌功能,对坏死的心肌组织没有任何影响;干细胞移植治疗由于存在伦理学上争议、机体排斥以及移植手段等限制,也未有新的突破。本实验就体内应用药物干预能否促进心源性和非心源性干细胞参与心肌缺血坏死后修复的问题进行研究。目的探讨应用丹参(Danshen)、美托洛尔(Metoprolol)药物干预对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌缺血坏死区c-kit、CD34阳性心脏干细胞(cardiac stem cells)修复作用的影响。材料和方法选择健康雄性SD成年大鼠(体质量150-200g)40只,由新乡医学院实验动物中心提供,以4mg/Kg的剂量持续腹腔注射盐酸异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)7天制备大鼠心肌缺血模型,利用肢体导联心电图确定大鼠心肌缺血模型制备成功。将造模成功的32只大鼠随机分为4组:(1)异丙肾上腺素对照组(ISO组)8只,每天同一时间腹腔注射及经口灌胃生理盐水2ml;(2)丹参干预组(DanShen组)8只,按10mg/kg的剂量腹腔注射丹参注射液;(3)美托洛尔干预组(Meto组)8只,按10mg/kg的剂量经口灌胃美托洛尔;(4)丹参和美托洛尔两药联合干预组(DanShen+Meto组)8只,分别按上述剂量给予腹腔注射丹参及经口灌胃美托洛尔处理,共给予14天制备药物干预模型。药物干预模型制备成功后取出心脏,制备冰冻切片行HE染色,确定心肌缺血坏死区;免疫荧光技术观察心肌缺血坏死区干细胞表面标记物c-kit、CD34及心肌早期转录因子GATA-4和缝隙连接蛋白Connexin43的表达情况。计算各组心肌缺血面积(MIA, Myocardial Ischemia Area),以缺血面积与总观察面的构成比代表心肌缺血区的实际面积;测定缺血坏死区c-kit、CD34干细胞标记物及心肌细胞标记物GATA-4、Connexin43免疫荧光表达强度,用免疫荧光平均灰度值表示。结果(1)腹腔连续注射盐酸异丙肾上腺素7天后的大鼠肢体导联心电图出现“J”点明显增高、T波幅增高至与R波同高(甚至高于R波幅),形成高大的近似于“M”型或“帐篷样”的单波,呈现典型的心肌缺血型改变。(2) DanShen组、Meto组和DanShen+Meto组大鼠心肌组织HE染色心室肌内膜下缺血面积小于ISO组(P<0.05),但DanShen组、Meto组和DanShen+Meto组之间进行两两比较无显著差异;(3)免疫荧光技术观察显示DanShen组、Meto组和DanShen+Meto组大鼠心肌组织与ISO组比较,于心肌缺血区及缺血周边部可见c-kit、CD34阳性干细胞标记物荧光表达强度增强(P<0.05),其中三组药物干预组之间c-kit阳性干细胞标记物荧光表达强度两两比较无显著性差异,DanShen+Meto组CD34阳性干细胞标记物荧光表达强度与DanShen组、Meto组相比,强度增强(P<0.05), DanShen组、Meto组CD34阳性干细胞标记物荧光表达强度相比较,无显著性差异;(4)于缺血区及周边区可观察到心肌细胞早期转录因子GATA-4及心肌缝隙连接蛋白Connexin43的表达。结论在大鼠心肌缺血性损伤的早期给予丹参、美托洛尔药物干预,能够促使心肌修复、减小心肌缺血面积,促进心肌缺血坏死及周边区的心源性及非心源性干细胞的迁移、增殖和新生心肌细胞的形成。
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