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目的:延龄草总皂苷（Trillium Total Saponins,TTB）是从土家族名药延龄草中提取出来的化合物。研究表明,延龄草总皂苷具有显著的抗结肠癌功效,但其具体、深入的作用机制尚未证实。本研究的目的是从细胞自噬和细胞凋亡这两方面探究其中一种单体化合物TTB2抗结肠癌作用机制,为延龄草皂苷成分抗肿瘤作用提供研究基础和理论依据。方法:1)光镜下观察TTB2作用结肠癌HCT116细胞后的形态变化;2)MTT法检测TTB2对HCT116细胞抑制率影响;3)透射电镜观察TTB2处理HCT116细胞后自噬空泡和自噬小体的形成;4)激光共聚焦显微镜下观察转染p EGFP-LC3质粒后外源性表达的GFP-LC3荧光蛋白的定位改变;5)流式细胞术检测细胞周期阻滞和细胞凋亡情况;6)Western Blot检测TTB2处理HCT116细胞后自噬及凋亡相关蛋白、m TOR信号通路相关蛋白以及野生型与突变型细胞系中RAS蛋白的变化情况。结果:1)光镜下可见经TTB2处理后的HCT116细胞形态不规则,细胞密度降低,呈现体积缩小,数量减少的趋势;2)MTT结果显示TTB2能明显抑制HCT116细胞的增殖且呈一定浓度依赖性;TTB2作用HCT116细胞24h后其IC50值为（2.17±0.11）μM;3)透射电镜下观察到经1μM TTB2处理HCT116细胞24h后,HCT116细胞中出现自噬空泡和自噬小体;经2μM TTB2处理HCT116细胞24h后可见明显的自噬空泡和自噬小体的形成;4)转染p EGFP-LC3真核表达质粒的HCT116细胞经TTB2处理后,激光共聚焦显微镜下可观察到外源性表达的GFP-LC3荧光蛋白在胞浆中由弥散分布转向斑点状聚集分布,且绿色荧光光团的聚集程度与TTB2的药物浓度正相关;5)流式细胞术结果显示,TTB2能够诱导细胞发生细胞周期阻滞,并且阻滞时期为S期;6)TTB2诱导HCT116细胞发生凋亡的比例随着药物浓度的增加而升高,TTB2与自噬抑制剂联用可降低凋亡比例,与自噬激活剂RAPA联用可增加细胞凋亡的比例;7)Western Blot结果显示,随着TTB2浓度的增加,自噬相关蛋白Beclin1、LC3B的表达量增加;促凋亡相关蛋白BAX表达水平增加,抗凋亡蛋白Bcl-2、caspase3的表达水平减少;TTB2与RAPA联用可增加自噬相关蛋白LC3B、凋亡相关蛋白BAX的表达;8)剂量依赖性实验表明,随着TTB2浓度的增加,p-m TOR/m TOR比值增加,p-AKT/AKT比值增加,p-ERK/ERK比值降低,RAS/β-actin比值降低;9)在点突变作用机制研究中,Western Blot实验结果表明与感染空载对照组慢病毒对比,野生型（WT）与突变型（5F）细胞系中RAS蛋白水平呈现高表达,而在TTB2作用12h后,与未加药组比较,野生型（WT）细胞系中RAS蛋白略有下降,而突变型（5F）细胞系有显著降低。结论:TTB2对结肠癌HCT116细胞的生长具有明显的抑制作用,并且能够将HCT116细胞周期阻滞在S期;TTB2能同时诱导HCT116细胞发生细胞自噬和细胞凋亡,抑制自噬可降低HCT116细胞凋亡比例,激活自噬可增加HCT116细胞凋亡的比例,这表明TTB2诱导的细胞自噬与细胞凋亡呈现协同关系,其机制可能与干扰m TOR信号通路有关;并且TTB2抗结肠癌的具体分子作用靶点并不是其上游蛋白靶点RAS蛋白中五个特定位点氨基酸。本研究结果将为延龄草皂苷成分抗结肠癌作用机制提供了一条新的思路。